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《人孤雌胚胎干細胞無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國修復重建外科雜志2013年5月第27卷第5期·559·人孤雌胚胎干細胞無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的建立梁銳王志強陳天星朱靜朱妹李英楊龍朱寶生【摘要】目的建立一種安全、有效、經(jīng)濟且適于人孤雌胚胎干細胞(humanparthenogeneticembryonicstemcells，hPESCs)體外培養(yǎng)的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系。方法將常規(guī)體外培養(yǎng)的hPESCs分別以mTeSRr”1培養(yǎng)基(對照組)和人包皮成纖維細胞的條件培養(yǎng)基(humanforeskinfibrobtasts．conditionalmedium，hFFs．CM)(實驗組)擴增培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察
2、兩組無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系下hPESCs的生長狀態(tài)；采用ALP檢測和核型分析研究hPESCs生物學特性；采用RT-PCR檢測hPESCs全能性標記物Oct．4的表達情況；通過體外和體內分化實驗觀察hPESCs向3個胚層分化的潛能。結果兩組hPESCs形態(tài)規(guī)則、不易分化，在形態(tài)、擴增速度等方面無明顯差異；已成功在體外培養(yǎng)l5代，兩組均能保持正常女性的二倍體核型46，XX和全能性；RT-PCR檢測示兩組Oct．4mRNA均呈陽性表達；體外分化均可形成擬胚體；在裸鼠體內均可形成含有3個胚層組織成分的畸胎瘤。結論hFFs．CM無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系可長期支持hPESC
3、s的生長并維持其未分化狀態(tài)，成功建立了一種不僅能維持hPESCs的有效擴增、減少動物源性污染、降低培養(yǎng)成本，還可滿足l臨床大規(guī)模應用的hPESCs無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系?！娟P鍵詞】人孤雌胚胎干細胞無飼養(yǎng)層條件培養(yǎng)基人包皮成纖維細胞ESTABLISHMENTOFFEEDER．FREECUL．TURESYSTEM0FHUMANPARTHENOGENETICEMBRYONICSTEMCELLS／LIANGRui，WANGZhiqiange,CHENTianxingd，ZHUJing~，ZHUShu，LIYing~，YANGLo，ZHUBaoshen~．Depa
4、rtmentofPathology,GeneticDiagnosisCente~theFirstPeople’sHospitalofYunnanProvince,KunmingYunnan，650032，P．R．China；DepartmentofOncology,砌BFirstAfiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity．Correspondingauthor：WANGZhiqiang,E—mail：wzqcy2000@126．com【Abstract】ObjectiveToestablishasafe，
5、effective，andeconomicfeeder—freeculturesystemwhichissuitableforthecultureofhumanparthenogeneticembryonicstemcells(hPESCs)nvitro．MethodshPESCswereculturedwithmTeSR1medium(controlgroup)andhumanforeskinfibroblasts—conditionalmedium(hFFs—CM)(experimentalgroup)．ThegrowthstatusofhPE
6、SCsinbothfeeder—freeculturesystemswereobservedwithinvertedmicroscope．Alkalinephosphatase(ALP)analysisandkaryotypeanalysiswereusedtostudythebiologicalcharacteristicsofhPESCs．TheexpressionofhPESCspluripotentmarkerOct一4wasanalyzedbyRT—PCR．Differentiationexperimentinvivoandinvitro
7、wasappliedtoobservethedifferentiationpotentialofhPESCsintothreegermlayers．ResultshPESCshadregularmorphologywithdificultyindifferentiationinbothculturesystems．NoobviousdifferencewasobservedinmorphologyandexpansionspeedofhPESCsbetween2groups．Aftersubculturedfor15passagesinvitro，
8、hPESCsin2groupscouldmaintainnormalfemalediploidkaryotype46，XX
