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1、附錄：常用試劑配制及應(yīng)用一、常用緩沖液、試劑的配制碳酸鹽緩沖液(Carbonate-BicarbonateBuffer)由于碳酸鹽pH值偏堿，因此，常用于pH>9的緩沖液配制（附表1）。附表1.0.2mol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.2～10.7）pH0.2mol/LNa2CO3(ml)0.2mol/LNaHCO3(ml)pH0.2mol/LNa2CO3(ml)0.2mol/LNaHCO3(ml)9.24.046.010.027.522.59.37.542.510.130.020.09.49.540.510.233.017
2、.09.513.037.010.335.514.59.616.034.010.438.511.59.719.530.510.540.59.59.822.028.010.642.57.59.925.025.010.745.05.0磷酸緩沖液(PhosphateBuffers，PB)磷酸鹽是使用最廣泛的一種緩沖劑，由于它們是二級(jí)解離，有二個(gè)pKa值，所以用它們配制的緩沖液，pH范圍最寬。NaH2PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21；Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。另外，磷酸鹽還有鉀鹽分子形
3、式，一般來說，低溫時(shí)鈉鹽難溶，鉀鹽易溶，因此，配制細(xì)胞培養(yǎng)用試劑時(shí)常常添加鉀鹽試劑，但若配制十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰胺凝膠電泳的緩沖液時(shí)，只能用鈉鹽而不能用鉀鹽，因?yàn)镾DS會(huì)與磷酸鉀生成難溶的十二烷基硫酸鉀。磷酸緩沖液的優(yōu)點(diǎn)為：①可配制成不同離子強(qiáng)度的緩沖液；②適用pH緩沖范圍較寬；③受溫度影響緩沖液pH值變化較?。虎茈x子強(qiáng)度對(duì)緩沖液pH影響較小，如0.1mol/L緩沖液稀釋10倍其pH變化小于0.1。磷酸緩沖液的缺點(diǎn)是：①磷酸鹽易與鈣離子（Ca2+）、鎂離子（Mg2+）及重金屬離子結(jié)合生成不溶的沉淀物；②可能
4、干擾某些生物化學(xué)反應(yīng)過程，如對(duì)某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。NaH2PO4的pH值偏酸性，可用作pH<4的緩沖液。Na2HPO4的pH值偏堿性，可用作pH>10的緩沖液。而pH＝6～8的中性緩沖液是更常用的緩沖液，需要NaH2PO4與Na2HPO4兩種磷酸鹽混合配制（附表2）。附表2.0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（pH5.7～8.2）pH0.2mol/LNaH2PO4(ml)0.2mol/LNa2HPO4(ml)pH0.2mol/LNaH2PO4(ml)0.2mol/LNa2HPO4(ml)5.793.56.5
5、7.039.061.05.892.08.07.133.067.05.990.010.07.228.072.06.087.712.37.323.077.06.185.015.07.419.081.06.281.518.57.516.084.06.377.522.57.613.087.06.473.526.57.710.589.56.568.531.57.88.591.56.662.537.57.97.093.06.756.543.58.05.394.76.851.049.08.14.295.86.945.055.08.23
6、.097.0磷酸鹽緩沖溶液（Phosphate-bufferedsaline,PBS)磷酸鹽緩沖液是在磷酸緩沖液基礎(chǔ)上添加NaCl以維持溶液的滲透壓，因此，PBS適用于做細(xì)胞緩沖液，常用PBS配制如下。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.44gKH2PO40.24g在800ml蒸餾水中溶解，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2～7.4加水定容至1L，15psi（1.05kg/cm2）高壓滅菌20min，室溫保存?zhèn)溆谩ris緩沖液（Tris-HClBuffer,TB）Tris的pH值偏于堿性，因此，通過添加HCl調(diào)節(jié)
7、pH至所需值，Tris-HCl緩沖液的離子強(qiáng)度（mol/L）是專指Tris的濃度，如某一特定pH的0.05mol/LTris緩沖液的配制是將50ml0.1mol/LTris堿溶液與附表3所示相應(yīng)體積（ml）的0.1mol/LHCl混合，加水至將體積100ml，即為0.05mol/LTris緩沖液。另外，按附表3制備的緩沖液，由于試劑來源的不同，緩沖液pH可能與所需略有差異，此時(shí)可通過稍許減少或增加HCl用量，精細(xì)調(diào)節(jié)pH至所需值。附表4.0.05mol/LTris緩沖液pH需0.1mol/LHCl（ml)pH需0.1mo
8、l/LHCl（ml)7.145.78.126.27.244.78.222.97.343.48.319.17.442.08.417.27.540.38.514.77.638.58.612.47.736.68.710.37.834.58.88.57.932.08.97.08.029.2Tris鹽緩沖液（TBS）：Tris
