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《兒茶素活性成分分子印跡聚合物的分子識(shí)別特性及固相萃取研究.pdf》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、第33卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究簡報(bào)第6期2005年6月ChineseournaIofAnaIyticaIChemistry857~860兒茶素活性成分分子印跡聚合物的分子識(shí)別特性及固相萃取研究*雷啟福鐘世安向海艷周春山于典(中南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,長沙4l0083)摘要以表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)為模板分子,!-甲基丙烯酸為功能單體,乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑,合成EGCG分子印跡聚合物。利用該聚合物對(duì)EGCG及其異構(gòu)體和結(jié)構(gòu)類似物進(jìn)行分子識(shí)別特性研究。結(jié)果表明:分子印跡聚合物對(duì)模板分子具有較高的選擇性和識(shí)別能力,而空白聚合物卻不具
2、備這樣的特性。在此基礎(chǔ)上,把聚合物用于固相萃取茶葉提取物茶多酚,分離富集其中的兒茶素活性成分單體EGCG,獲得了滿意的效果。關(guān)鍵詞分子印跡聚合物,分子識(shí)別,固相萃取,表沒食子兒茶素沒食子酸酯1引言兒茶素活性成分是茶葉中的特有成分,主要包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigaIIocatechin-gaI-Iate,EGCG)、沒食子兒茶素沒食子酸酯(gaIIocatechin-gaIIate,GCG)、表兒茶素(epigaIIocatechin,EC)、兒茶素(catechin,C)、表兒茶素沒食子酸酯(epicatechinGaIIate,ECG)、兒茶素
3、沒食子酸酯(catechinGaI-[l]Iate,CG)、表沒食子兒茶素(epigaIIocatechin,EGC)和沒食子兒茶素(gaIIocatechin,GC)等。由于EGCG具有優(yōu)異的抗氧化、抗癌、防癌功能,其分離純化成為各國醫(yī)藥、食品界的研究熱點(diǎn)。分子印跡聚合物(MoIecuIarimprintedpoIymers,MIP)是為印跡分子量身定做的高分子聚合物,洗去模板分子以后,能留下在形狀、大小以及識(shí)別位點(diǎn)都與模板分子相匹配的空穴,該空穴能重新識(shí)別模板[2,3]分子。MIP已廣泛應(yīng)用于固相萃取(SPE),包括清除環(huán)境和生物樣品中的雜質(zhì)和從復(fù)雜樣品
4、中富集[4~6][7]有效成分。最近,也有人開始把MIP用于固相萃取中藥中的有效成分。由于固相萃取對(duì)MIP的微粒單分散性要求不高,本研究采用本體聚合法合成對(duì)EGCG具有識(shí)別能力的分子印跡聚合物,并嘗試把該聚合物用于固相萃取茶葉提取物茶多酚(teapoIyphenoIs,TP)中的EGCG。2實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器和試劑高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng):BT8l00泵、BT8200UV-VIS檢測器以及C-R6A數(shù)字積分記錄儀(德國Biotronik),ProdigyODSCl8色譜柱(250X4.60mm,5!m,美國Phenomenex);TGL-l6G冷凍離心機(jī)
5、(上??茖W(xué)儀器廠);ZD-2調(diào)速多用振蕩器(江蘇望華科教儀器廠)。EGCG、GCG、EGC、ECG(長沙華欣科技開發(fā)有限公司);偶氮異丁腈(AIBN,上海試劑廠);甲基丙烯酸(MAA,天津市科密歐化學(xué)試劑廠);乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA,上海和氏璧化工有限公司)。MAA和EGDMA使用前減壓蒸餾除去阻聚劑。乙腈為色譜純,其他試劑為分析純。2.2EGCG分子印跡聚合物的制備將EGCG0.9l68(g2mmoI)、MAA0.6887g(8mmoI)溶解于適量的氯仿,靜置過夜。在加入EGD-MA7.9200(g40mmoI)、AIBN0.0657g(0.4m
6、moI)后,超聲處理20min,使其充分溶解。混合溶液中通入N2l5min后密封,于0C,366nm紫外燈光照下聚合48h,使聚合反應(yīng)完全,得堅(jiān)固的棒狀固體聚合物(MIP)。將該聚合物粉碎、過45!m篩,用91l的甲醇乙酸溶液(體積比)在索氏提取器中回流l8h,除去印跡分子,最后用乙腈反復(fù)沉降以除去細(xì)小顆粒,真空干燥,備用。制備空白聚合物(BP)時(shí),除不2004-06-29收稿;2004-ll-08接受本文系湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.043080),國家中小企業(yè)創(chuàng)新基金項(xiàng)目(No.02C262l4300675)858分析化學(xué)第33卷加模板分子以外,其
7、它方法同上。2.3HPLC檢測條件EGCG、GCG、ECG、EGC等4種兒茶素單體均采用下列色譜條件檢測:色譜柱為ProdigyODSCl8柱(250mmX4.60mm,5!m),流動(dòng)相為甲醇1乙酸1水(24.510.5175,!"!),流速為0.8mL/min,進(jìn)樣量為6!L,檢測波長為278nm。定量分析方法見文獻(xiàn)[8]。2.4分子識(shí)別及固相萃取實(shí)驗(yàn)將40.0mg制得的干MIP于帶蓋的聚四氟乙烯瓶中,加入3mL不同濃度EGCG與GCG的混合乙腈溶液,在室溫下振蕩l2h,離心分離,取上清液用0.45!m的微濾膜過濾后,于HPLC上檢測各組分的平衡濃度。根據(jù)
8、結(jié)合前后溶液中濃度的變化分別計(jì)算聚合物對(duì)兩個(gè)底物的結(jié)