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1、5-Aza-CdR對人食管癌細(xì)胞株生物學(xué)行為及TFPI-2mRNA表達(dá)的影響5-Aza-CdR對人食管癌細(xì)胞株生物學(xué)行為及TFPI-2mRNA表達(dá)的影響作者：杜雅冰，邵應(yīng)舉，樊青霞，孫楨，王琳，趙培榮作者單位：(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南鄭州 450002)【摘要】目的探討5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干預(yù)對食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706生長增殖及其組織因子途徑抑制物2(tissuefactorpathwayinhibitor-2，TFPI-2)基因表達(dá)的影響。方法選取食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706，并用不同
2、濃度的5-Aza-CdR處理該細(xì)胞株。MTT法檢測干預(yù)前后細(xì)胞增長率的變化，F(xiàn)CM法檢測干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化，RT-PCR技術(shù)檢測干預(yù)前后Eca9706細(xì)胞TFPI-2基因mRNA的表達(dá)，免疫組化檢測干預(yù)前后Eca9706細(xì)胞TFPI-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化狀態(tài)，經(jīng)5-Aza-CdR處理后，超甲基化狀態(tài)解除，細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞凋亡率明顯提高(P<0.05);細(xì)胞中TFPI-2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，同時mRNA的表達(dá)水平也較處理前明顯提高(P<0.05)。結(jié)論 食管癌細(xì)胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mRNA表
3、達(dá)，當(dāng)其超甲基化解除后，細(xì)胞增殖受到抑制，同時細(xì)胞凋亡率相應(yīng)提高。【關(guān)鍵詞】食管癌;組織因子途徑抑制物-2;5-氮雜-2-脫氧胞苷;甲基化;免疫組化;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng);凋亡ABSTRACT：Objective Toexploretheeffectsof5-Aza-2-deoxycytidine(5-Aza-CdR)interventiononthegrowthandproliferationofEca9706celllineandproteinexpressionoftissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPI-2).Methods Eca9
4、706celllinewastreatedby5-azaCdRofdifferentconcentrations;MTT，flowcytometry，immunohistochemistryandRT-PCRwereusedtodeterminethecellgrowth，apoptosis，andtheexpressionofTFPI-2geneanditsprotein.Results Eca9706celllinehadhypermethylationofTFPI-2.Afterdemethylationby5-Aza-CdRtreatment，theprolif
5、erationofEca9706wasinhibited，theapoptosisratewasalsoincreasedsignificantlyintheconcentration-dependentmanner.RT-PCRdetectedthatmRNAexpressionofTFPI-2geneinEca9706celllinerecoveredsignificantly(P<0.05).Conclusion 5-Aza-CdRcanslowthegrowthofEca9706cell，increasetheapoptosisrate，reactivateth
6、eTFPI-2genetranscriptionandproteinexpressionbydemethylation.KEYWORDS：esophagealcarcinoma;tissuefactorpathwayinhibitor-2;5-Aza-CdR;methylation;immunohistochemistry;RT-PCR;apoptosis組織因子途徑移植物2(tissuefactorpathwayinhibitor，TFPI-2)是絲氨酸蛋白酶抑制物，在調(diào)控腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移方面起著重要作用。目前，關(guān)于TFPI-2在食管癌中的基因表達(dá)情況的分析研究尚少。
7、本研究旨在探討TFPI-2基因的失活機(jī)制，并尋找食管癌治療的新靶點。1 材料與方法1.1 材料RPMI-1640培養(yǎng)基購自北京索萊寶生物科技有限公司;標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清購自天津市灝洋生物制品科技有限公司;Trizol試劑購自MBI公司;RT-PCR試劑盒購自MBI公司;5-Aza-CdR購自Sigma公司;人食管癌細(xì)胞株Eca9706由鄭州大學(xué)腫瘤生物學(xué)研究室惠贈。1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和藥物處理人食管癌細(xì)胞Eca9706以含10mL/L胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，37℃、50mL/LCO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每2～3d消化傳代1次。1.3 MTT法
