高效液相色譜蒸發(fā)光散射法測定

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1、第38卷分析化學(FENXIHUAXUE)研究報告第4期2010年4月ChineseJournalofAnalyticalChemistry522～526DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.00522高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定牛黃中多種有效成分含量及其質(zhì)量相關(guān)性研究1，2*11，3421劉葦金城孔維軍王海濤龔千鋒肖小河12(解放軍中藥研究所解放軍第302醫(yī)院，北京100039)(江西中醫(yī)學院藥學院，南昌330004)34(成都中醫(yī)藥大學藥學院，成都610075)(解放軍第306醫(yī)院，北京100101)摘要建立高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法(

2、HPLC-ELSD)同時快速測定牛黃中7種組分的含量的方法。色譜柱為UltimateAQ-C18柱，流動相為乙腈-0.2%甲酸水溶液，梯度洗脫，流速1mL/min;蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù):漂移管溫度100℃，載氣(N2)流速1.9L/min。在選定色譜條件下，膽固醇、各種膽汁酸及其鈉鹽峰形良好且能達到很好地分離。各組分色譜峰峰面積的對數(shù)與濃度的對數(shù)呈良好線形關(guān)系(r>0.9972);標準加入回收率為98.8%～112.7%;7種組分的最低檢出限為0.001～0.007g/L。本方法可簡便、快速地同時檢測不同牛黃樣品中7種組分的含量并可表征不同牛黃樣品的質(zhì)量，從

3、而為該名貴藥材的質(zhì)量控制提供更全面的依據(jù)和參考。關(guān)鍵詞牛黃;高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測;多組分;同時測定1引言［1］牛黃為?？苿游锱ostaurusdomesticusGmelin的干燥膽結(jié)石，其天然資源奇缺且價值昂貴，而［2，3］代用品(培植牛黃、體外培育牛黃與人工牛黃)的價格和質(zhì)量差異懸殊，必然導致療效的巨大差異。［4］為此，國家SFDA明確限定了天然牛黃及其代用品在調(diào)劑和制劑入藥方面的使用范圍。針對牛黃品種、質(zhì)量的復雜性和多樣性，有必要對這些樣品建立實用和有效的質(zhì)控方法?！吨袊幍洹?2005版)規(guī)定，以薄層色譜法定性檢驗天然牛黃中膽酸、去氧膽酸和

4、膽紅素及人工牛黃中膽酸、豬去氧膽酸、?；撬岬龋繙y定的天然牛黃中膽酸不得少于4.0%，紫外-可見分光光度法測得天然牛黃中的膽紅素不得少于35.0%及人工牛黃中的含膽酸不得少于13.0%，膽紅素不得少于［1］0.63%。文獻［5，6］報道，以其中一種或幾種成分為指標來測定牛黃質(zhì)量，而豬去氧膽酸作為牛黃中重要成分之一，卻少見報道。因膽酸類成分無紫外吸收或者紫外吸收很弱，常用檢測器很難同時反映所［7］有組分的信息，更難準確監(jiān)測和控制其主要的藥效組分。蒸發(fā)光散射檢測器(Evaporativelightscatter-ingdetector，ELSD)是一種通用型質(zhì)

5、量檢測器，可分析不含共軛結(jié)構(gòu)或無紫外吸收的物質(zhì)，并能在多溶［8～15］劑梯度的情況下獲得穩(wěn)定的基線和較低的噪音，也可在較快的分離速度下獲得理想的分辨率。本實驗采用HPLC-ELSD同時測定牛黃中7種組分的含量，并以此7種組分含量為指標，對不同樣品的質(zhì)量進行比較和預測分析，為牛黃的質(zhì)量控制提供參考，亦為名貴中藥材化學有效成分的同時測定及生物評價和質(zhì)量控制提供了一種模式。2實驗部分2.1儀器與材料1100Series高效液相色譜儀，配自動進樣器及二極管陣列檢測器(Agilent公司);色譜柱為UltimateAQ-C18色譜柱(25cm×4.6mm，5μm);A

6、lltech-2000型ELSD檢測器(Alltech公司)。乙腈為色譜純(Fisher公司);甲酸及其它試劑均為分析純(北京化學分析公司)。牛黃膽酸鈉、膽酸、熊去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸、去氧膽酸和膽固醇均購于中國藥品生物制2009-09-17收稿;2009-12-07接受本文系科技重大專項“重大新藥創(chuàng)新”(No.2009ZXJ0904-057)資助*E-mail:pijincheng@126.com第4期劉葦?shù)?高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定牛黃中多種有效成分含量及其質(zhì)量相關(guān)性研究523品檢定所。天然牛黃:A(北京同仁堂藥店)，B(中國藥材公司)，

7、C和F(中國藥品生物制品檢定所);人工牛黃:D(北京同仁堂藥店)，E(重慶格瑞林藥業(yè)有限公司)，以上藥材均經(jīng)解放軍302醫(yī)院肖小河研究員鑒定。2.2色譜條件流動相:A為0.2%甲酸水溶液，B為乙腈;梯度洗脫程序:0min，58%A，15.00min，45%A，25.00min，10%A。流速:1mL/min;進樣量:7μL;柱溫:30℃;ELSD檢測器參數(shù):漂移管溫度:100℃;載氣(N2)流速:1.9L/min;不分流模式(Impactoff)。2.3樣品處理分別精密稱量A、B、D、E樣品(0.1±0.005)g，C樣品0.0105g，F(xiàn)樣品0.0434g

8、于25mL容量瓶中，加入10mL甲醇，超聲30min