基因藥物載體中殼聚糖作為細(xì)胞支架材料的初步研究-論文.pdf

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1、：!蘭：ChineseJournalofMedicinalGuide20I3Volume15NO．9(Seria1NO．1I9)基因藥物載體中殼聚糖作為細(xì)胞支架材料的初步研究呂永銘冀曉慶楊金榮，張慧娟(人}人【I院約’，人300I21)殼聚糖是·f4,4P~6IF電荷的堿性多糖，來源廣泛，價(jià)格1．2．2吸水率及孔隙率的測(cè)定取質(zhì)鼉?yōu)閃a(6J凍f史架置低廉，兼彳丁牛物_牛}{容性和可降解性，已經(jīng)作為基岡、藥物的于蒸餾水中24h，吸1：表而的水分，稱翳-qKWb，吸水率為(Wa-載體，卜物領(lǐng)域普遍使Jfl?，隨著組織：[程

2、的發(fā)展，體外人Wb)／Wa。培養(yǎng)tJ-,一zLI~n官對(duì)人體損害的器官進(jìn)行修復(fù)的技術(shù)越來越成采用液體置換法測(cè)定支架空隙率。用游標(biāo)尺測(cè)量殼熟，體外組織器官的培養(yǎng)需要生物降解性比較好的載體，殼聚聚糖支架表觀體積天平稱量支架干質(zhì)量11，將支架吸滿無糖符合達(dá)條件，因此殼聚糖支架成為了研究的熱點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)水乙醇后，用濾紙吸去表面多余的液體，稱質(zhì)最為Q，無水乙采用海潦酸鈉、明膠和肝素對(duì)殼聚糖支架進(jìn)行修飾，對(duì)這些醇密度P，則支架空隙牢為Jp=(Q—m)×V／P’。支架的扎隙牢干¨水牢進(jìn)行分析，并且將肝細(xì)胞種植干支架1．2-3原代肝細(xì)胞

3、培養(yǎng)取成年天津軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院小鼠，觀察qq．1V,jG~飾的芰架對(duì)肝細(xì)胞貼壁和增殖的影響。脫頸椎處死，取出肝臟，用胰酶消化，接利f培養(yǎng)瓶巾，lj=l材料和方法37℃，95％的O，5％C01培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞長(zhǎng)到(70～80)％I．1材料融合，用胰酶進(jìn)行消化，接種于無菌的支架I，干培養(yǎng)箱【{J繼殼聚糖(浙江，物科技有限公司，產(chǎn)批續(xù)培養(yǎng)，以后每24hq"-最更換培養(yǎng)液。I1．2-4細(xì)胞貼壁率測(cè)定將l05個(gè)肝細(xì)胞按利t1支架L，f培養(yǎng)lr7J1‘：200603200)，叫膠(J海銘睿生物科技有限公司，生產(chǎn)批~,J：P707

4、97)，海藻酸鈉(菏島明川海藻集團(tuán)有限公司，牛產(chǎn)批箱中培養(yǎng)6h后，用PBS將沒貼姥的細(xì)胞洗掉，加入培養(yǎng)基后，‘：9005—38—3)，素鈉(人津乍物化學(xué)制藥有限公司，生產(chǎn)批每：fL]／ll(50mg／m1)MTT溶液lOOul，培養(yǎng)4h)~-’力I1150ulDMSO，號(hào)‘：20120707，藥準(zhǔn)字：Hl2020505)，MTT(北京索萊寶科技充分震蕩之后，使用分光光度計(jì)測(cè)定OD4901't91"I~[，各組均設(shè)有限公)，DMEM培養(yǎng)液(GIBCO)，胎牛清(Hyclone)，胰哺空白對(duì)照。(Gibco，笑罔)，其它試

5、劑均為罔產(chǎn)的分析純?cè)噭?．2．5細(xì)胞增殖的檢測(cè)取l0個(gè)細(xì)胞按種于964L板支架上，1．2方法在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7天后每4LDa入MTTt~液l00ul，培養(yǎng)1．2．1多孔殼聚精支架(I0,N備取0．06ml3M的殼聚糖溶液4h后，加150ulDMSO，充分震蕩之后，使用分光光度tt-N定氍_f964L板每扎Ifl，一70冰箱過夜，次日使用冷凍干燥機(jī)至fOD490的值，各組均設(shè)空白對(duì)照?？疾旒?xì)胞不同的陰離子燥為l每D,0．25mi0．5M的NaOH，中和多余的醋酸，孵育修飾的支架的增殖速度‘。20rain，川PBS洗

6、至Ffl1J陛，再次凍f即可以得到殼聚糖支架。1．3統(tǒng)計(jì)分析分別往先聚糖支架每4L)JIJ0．25ml0．1％的海藻酸鈉、0．5％的本實(shí)驗(yàn)的所有數(shù)據(jù)通過SPSSI5．0進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)通過(HJ】膠幣¨0．5％的Hf索鈉挪育24h洱凍1二即可成為經(jīng)過不同修4s)表示，組間比較通過T檢驗(yàn)，P

7、i15卷9期(總第119期)2結(jié)果架經(jīng)過l％海藻酸鈉、0．5％的明膠和0．5％l'lgJlf柰鈉f1．i．illJ，2．1書究制備的殼聚糖支架的孔隙率和吸水半分圳為明的增加了殼聚糖支架A94L隙率和吸水半(，J<0．01)，(78．5t8．2)％和(95．8}8．7)％，經(jīng)過海藻酸鈉、明膠干¨fJr素修具仃統(tǒng)汁學(xué)意義。有研究示孔隙率和吸水豐塒J胞的飾J史fl"J4L隙牢l幣u吸水率明顯提高，P<0．01，具仃統(tǒng)生長(zhǎng)具仃很重要的作用，孔隙率和吸水牢的{址一J‘以增細(xì)汁。意義(1)。胞的生長(zhǎng)空間，由r氣和養(yǎng)分的供給，使f!

8、}胞JL-'fi‘虹『JIJ表I不同材料修飾的殼聚糖支架的子L隙率和吸水率比較充分的空間和營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行生長(zhǎng)。影響細(xì)胞貼壁的因素主要有細(xì)胞本身的素材T}09因素，細(xì)胞本身的因素主要是指細(xì)胞膜的成頃等h素，如所帶電荷、細(xì)胞膜與材料接觸的時(shí)I'fiJ、細(xì)胞~1'19疏水性、細(xì)胞膜的分子運(yùn)動(dòng)等，材料兇素主址材~'l-l'19ill和性質(zhì)，粗糙