開口箭乙醇提取物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡活性研究-論文.pdf

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1、中南藥學(xué)2014年8月第12卷第8期CentralSouthPharmacy．August2014．Vo1．12No．8開口箭乙醇提取物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡活性研究謝錦艷，許苗苗，劉銀環(huán)，宋蓓，劉越，劉海靜，宋小妹(1．陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西咸陽712046；2．陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，西安710065)摘要：目的探討開口箭根部乙醇提取物(ERT-95)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2生長的影響及其抗腫瘤作用的可能機(jī)制。方法采用MTT法繪制HepG2細(xì)胞生長曲線，檢測ERT-95對(duì)HepG2細(xì)胞的生長抑制作用；采用光學(xué)顯微鏡觀察HepG2細(xì)胞的凋亡形態(tài)變化；采用Hoc

2、hest染色原理檢測HepG2細(xì)胞凋亡情況；采用Westernblot檢測CytC蛋白的表達(dá)；采用caspase活性檢測試劑盒檢測caspase．3、caspase．9的活性變化：采用DNAladder凝膠電泳技術(shù)檢測DNA的裂解情況。結(jié)果MTT結(jié)果顯示，ERT-95對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制作用呈劑量依賴性(／Q為52．57gg·mL)；光學(xué)顯微鏡下，處理組細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓等形態(tài)變化：Hochest．33258染色后的處理組細(xì)胞呈現(xiàn)典型的凋亡結(jié)構(gòu)；Westernblot結(jié)果顯示，隨著藥物濃度增加，CytC蛋白表達(dá)上調(diào)；caspase活性檢測顯示，caspase-

3、3、caspase-9活性逐步升高；與對(duì)照組相比，處理組瓊脂糖凝膠電泳圖譜出現(xiàn)DNA條帶。結(jié)論ER195有顯著的體外促腫瘤細(xì)胞凋亡作用，初步研究其促腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制是通過線粒體釋放cVtc，進(jìn)一步活化caspase一9和caspase．3而激活內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶，導(dǎo)致DNA裂解而實(shí)現(xiàn)的關(guān)鍵詞：開口箭；抗腫瘤；機(jī)制；肝癌細(xì)胞HepG2中圖分類號(hào)：R285，R965文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1672．2981(2014)08—0735—05doi：10．7539~．issn．1672-2981．2014．08．004Antitumoreffectofethanolext

4、ractfromtherootofTupistrachinensisBaker．onthelivercancercelllineHepG2XIEJin-yan，XUMiao-miao，LIUYin．huan，SONGBei，LIUYue，LIUHai-jing，SONGXiao．mei(1．SchoolofPharmacy，ShaanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，XianyangShaanxi712046；2．ShaanxiFoodandDrugInspectionOfice，Xi’an710065)Abstr

5、act：ObjectiveToobservetheantitumoreffectofethano1extractfromtherootofTupistrachinensisBaker．(ERT-95)onthelivercancercelllineHepG2．a(chǎn)ndtoexploreitspotentialmechanisms．MethodsThegrowthcurvesandthecytostaticeffectOfEI95ontheHepG2cellswereevaluatedbyMTTassay．ThemorphologicalchangesinHepG2

6、cellswereobservedbyopticalmicroscopes；EI95inducedcellapoptosisdeathonHepG2cellswasmeasuredbyHochest33258staining．TheeffectonexpressionsofCytochromeC(CytC、proteininHepG2cellsweredetectedbyWesternblot．Caspase．3andcaspase一9activitiesweremeasuredwithcaspaseactivityassaykit．Theinfectedcel

7、lswereexaminedforDNAfragmentationbyagarosege1electrODhOresis．ResultsMTTassayshowedthatEr．95wasabletoinhibittheHepG2cellsinadose—dependentmanner．Theconcentrationrequiredfor50％inhibition(IC50)was52．57g。mL一1．Themorphologicalchangesduetoapoptosisincluedeshrinkingofcellsandroundcellsunder

8、anopticalmic