口服齊墩果酸所致膽汁淤積性肝損傷研究-論文.pdf

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1、毒理學(xué)雜志2013年lO月第27卷第5期JToxicolOctober2013Vo1．27No．5中圖分類號：R994文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1002—3127(2013)05—0363—05·實驗研究·口服齊墩果酸所致膽汁淤積性肝損傷研究萬曉莉，曾奎，張丹，劉杰，陸遠富(1．遵義醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室貴州省基礎(chǔ)藥理重點實驗室，貴州遵義563000；2．黔南名族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校)【摘要】目的觀察齊墩果酸(oleanolicacid，OA)所致小鼠膽汁淤積性肝損傷，并探討其肝毒性的可能機制。方法雄性昆明小鼠

2、，隨機分為溶劑對照組，OA225mg／kg組、450ms／kg組、900mg／kg組和1350mg／kg組，給藥組采用灌胃給藥，溶劑對照組采用玉米油等體積灌胃，1次／d，連續(xù)10d，末次給藥24h后收集小鼠血和肝組織，計算小鼠肝系數(shù)，分別檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(T—BIL)、直接膽紅素(D—BIL)；觀察肝病理組織學(xué)變化；并應(yīng)用實時定量RT-PCR檢測膽汁淤積性肝損傷相關(guān)基因的表達水平。結(jié)果OA450、900和1350mg／kg組小鼠體重下降趨勢明顯；并使小

3、鼠肝指數(shù)上升；高劑量組(OA900和1350ms／kg)ALT、AST、T．BIL、D—BIL升高(成劑量依耐性)；病理檢查發(fā)現(xiàn)，高劑量組小鼠肝細胞出現(xiàn)明顯水腫、凋亡、壞死和羽毛樣變性(膽汁淤積性肝損傷)；此外，高劑量組小鼠肝血紅素氧化酶一1(HO一1)mRNA表達上升，而高劑量組小鼠肝細胞色素P4507a1(CYP7a1)、鈉離子一?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運多肽(Ntcp)、有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽1b2(Oatplb2)、膽鹽輸出泵(Bsep)mRNA表達均減少。結(jié)論大劑量口服OA可致膽汁淤積性肝損傷，可能與影響膽

4、汁酸的生成與轉(zhuǎn)運有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】齊墩果酸；肝毒性；膽汁淤積齊墩果酸(oleanolicacid，OA)，為齊墩果酸烷型濕度50％～55％，明暗交替時間12／12h，自由攝水進五環(huán)三萜類化合物，是一種從植物中提取的天然產(chǎn)物，食。SPF動物使用合格證號：SYXK(黔)2011-004。實以游離或結(jié)合成苷的形式廣泛存在于果蔬和中草藥驗前小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。中?，具有保肝、降脂、抗炎、抗過氧化等藥理作用，是1．2主要試劑和儀器治療急性黃膽型肝炎和慢性病毒性肝炎的口服非處方1．2．1試劑：齊墩果酸由貴陽制藥廠提

5、供(純度藥物。但不少“保肝藥”用之不當(dāng)常引起肝毒性，其99％)；血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶過度反應(yīng)可將“保肝”轉(zhuǎn)變?yōu)椤案味拘浴弊饔?，有研?AST)、總膽紅素(T-BIL)、直接膽紅素(D．BIL)生化表明：OA既有肝保護活性又有弱的肝毒性，長期過指標(biāo)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供；RNA量應(yīng)用OA或含OA的中草藥可產(chǎn)生膽汁淤積。純化試劑盒由上海華舜生物技術(shù)有限公司提供；Power現(xiàn)代研究表明：膽汁淤積是由于膽汁形成、分泌、轉(zhuǎn)運、SYBRGreenPCR(AppliedBiosy

6、stems)；HighCapacity排泄等代謝功能紊亂而引起。本實驗旨在探討多CDNAReVerseTranscriptionKits(AppliedBiosystems)；次口服OA所致膽汁淤積性肝損傷與膽汁的生成和轉(zhuǎn)Trizol試劑由寶生物工程(大連)有限公司提供，其余運的關(guān)系，以期明確口服OA引起肝損傷的“劑量一效試劑均為分析純。應(yīng)”關(guān)系，這不但對安全、有效的應(yīng)用OA來治療疾病1．2．2儀器：實時定量RT-PCR擴增儀(美國Bio—Rad或作為保健食療至關(guān)重要，而且對其他中藥及其提取公司)，全

7、波長酶標(biāo)儀(美國Thermo公司)，RNA逆轉(zhuǎn)物引起肝毒性的機制也有借鑒作用。錄儀(德國Eppendorf公司)，TU1810紫外分光光度儀(北京譜析儀器廠)，3K3型高速冷凍離心機(德國1材料與方法Sigma公司)，光學(xué)顯微鏡(德國Leica公司)。1．3方法1．1動物昆明種小鼠，雄性，10周齡，由重慶第三軍醫(yī)大大坪醫(yī)院實驗動物中心提供，動物許可證號：1．3．1實驗分組及給藥方法：25只小鼠，隨機分成5組，即溶劑對照組、OA225、450、900和1350mg／kgCXK(渝)2007-0005，動

8、物飼養(yǎng)SPF級，溫度20～22℃，組，每組5只，灌胃給藥，1次／d，連續(xù)10d，溶劑為玉米油，溶劑對照組灌服等體積玉米油?；痦椖浚嘿F州省科技廳藥物代謝動力學(xué)平臺項目(黔科2008-002)貴1．3．2一般情況觀察：給藥期間每天記錄小鼠體重、州省研究生創(chuàng)新基地(023)作者簡介：萬曉莉，碩士研究生，研究方向：藥理代謝與毒理學(xué)。觀察進食、飲水、毛色、活動、精神狀態(tài)、大小便等。通訊作者：陸遠富，教授，研究方向：藥理代謝與毒理學(xué)。1．3．3血液樣本采集和血生化