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《MS培養(yǎng)基及常用試劑的配制.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、一、MS培養(yǎng)基母液的配制母液成 分規(guī)定量濃縮倍數(shù)稱(chēng)取量（mg）母液體積（ml）配制1升培養(yǎng)基吸取量定容編號(hào)種類(lèi)1大量元素KNO3190010190001000100NH4NO316501016500MgSO4·7H2O370103700KH2PO41701017002CaCl2·2H2O44010440010001003微量元素MnSO4·4H2O22.31002230100010ZnSO4·7H2O8.6100860H3BO36.2100620KI0.8310083Na2MoO4·7H2O0.2510025CuSO4.5H2
2、O40.0251002.5CoCL2.6H2O0.0251002.54鐵鹽Na2-EDTA37.31003730100010FeSO4.4H2O27.810027805有機(jī)物甘氨酸2.010010050010鹽酸吡哆醇0.510025鹽酸硫銨素0.11005煙酸0.5100256肌酸100100500050010注意：1．大量元素按照使用時(shí)高10倍的數(shù)值稱(chēng)取，分別將各種化合物稱(chēng)量后，除CaCl2·2H2O單獨(dú)配制外，其余化合物混合在500ml燒杯中加適量蒸餾水溶解，用玻璃棒攪拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸餾水定容至刻度，
3、置小口瓶中保存，貼上標(biāo)簽注明化合物名稱(chēng)（或編號(hào)），濃縮倍數(shù)，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。2．微量元素母液的配制按要求濃縮100倍的數(shù)值稱(chēng)取，分別將各種化合物稱(chēng)量除鐵鹽（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作為一組單獨(dú)配制外，其余化合物可混合置于燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，貼上標(biāo)簽。3．鐵鹽配制將FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分別溶于450ml蒸餾水中，加熱，不斷攪拌，溶解后，兩液混合，調(diào)PH至5.5加水定容至100
4、0ml，置于小口瓶中，貼上標(biāo)簽。4．有機(jī)物母液配制，按母液要求濃縮50倍，除蔗糖按3%單獨(dú)臨時(shí)稱(chēng)量外，其余分別稱(chēng)量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，貼上標(biāo)簽。5．母液最好在2~4℃4的冰箱中貯存，特別是有機(jī)類(lèi)物質(zhì)，貯存時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，無(wú)機(jī)鹽母液最好在一個(gè)月內(nèi)用完，如發(fā)現(xiàn)有霉菌和沉淀產(chǎn)生，就不能再使用。1．制備母液和營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基時(shí)，所用蒸餾水或無(wú)離子水必須符合標(biāo)準(zhǔn)要求，化學(xué)藥品必須是高純度的（分析純）。2．稱(chēng)量藥物采用高靈敏度的天平，每種藥品專(zhuān)用一藥匙。．生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液配制：為了操作方便，節(jié)約時(shí)間，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑也可
5、如同配制母液一樣，先配成原液，這樣配制培養(yǎng)基時(shí)只要稍加計(jì)算，按需要量取即可。不同藥品在配制時(shí)若不溶于水，可用少量不同的溶劑先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生長(zhǎng)素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加熱。激動(dòng)素（KT）和6-芐基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的鹽酸中，葉酸需用少量稀氨水溶解。稱(chēng)取50mg生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升則含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)0.5mg，配制后一般要求在低溫（0~4℃）保存，配制培養(yǎng)基時(shí)如每升
6、（1000ml）需添加的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑物質(zhì)為0.5mg時(shí)，則取1ml母液即可。二、培養(yǎng)基配制和滅菌一．養(yǎng)培養(yǎng)基配制程序(一).母液吸取量的計(jì)算配制培養(yǎng)基的升數(shù)公式1：母液吸取量=母液體積（CC）×——————————母液濃縮倍數(shù)培養(yǎng)基要求的含量公式2：母液吸取量=———————————（各種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑）母液每CC的含量（二）各種母液按順序編號(hào)排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.鐵鹽；E.有機(jī)物；F．生長(zhǎng)素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA稱(chēng)取50mg，NAA用少量95%酒精溶解后加蒸餾水定容至
7、1000ml；G..細(xì)胞分裂素、激動(dòng)素（KT）配制0.5mg/ml的KT稱(chēng)50mgKT用少量1NHCL溶解后,加蒸餾水定容至100ml。(三) 配制培養(yǎng)基（1000ml）1.瓊脂:稱(chēng)取5~7g瓊脂，加入300ml蒸餾水，加熱溶解直至完全溶解為止.2.蔗糖3%用質(zhì)量較好的白糖代替，稱(chēng)取30g白糖，溶于溶有瓊脂的300ml蒸餾水中。3.各種母液的吸取（1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml（2）分別用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），鐵鹽（D）母液各10ml（3）用10ml移液管
8、或吸管吸取有機(jī)物（H）10ml（4）移取激素 將上述溶液全部混合于瓊脂與蔗糖溶液中，混合均勻后，加熱至80℃左右，用酸度計(jì)或精密PH試紙測(cè)定培養(yǎng)基的PH一般要求5.8~6.0，過(guò)酸過(guò)堿則用1NNaoH和1NHCL調(diào)整。4二．分裝：用一個(gè)接有膠管的分裝器趁熱裝培養(yǎng)基，1000m
