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《IL-8及其受體在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及其意義-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)2o13年1月第7卷第1期ChinJClinicians(ElectronicEdition)，January1，2013，V01．7，No．1·短篇論著·IL一8及其受體在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及其意義王吉榮武傳星【摘要】目的探討IL-8及受體在肝癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法ELISA檢測(cè)血清中IL一8表達(dá)水平，RT．PCR檢測(cè)IL-8mRNA及受體CXCR1、CXCR2mRNA的表達(dá)水平，免疫組化檢測(cè)IL一8在肝癌組織中的表達(dá)。結(jié)果肝癌患者血清【L-8表達(dá)明顯高于良性腫瘤患者(P<0．0
2、5)。RT-PCR肝癌組織中IL-8mRNA及其受體CXCR1、CXCR2mRNA的表達(dá)明顯高于癌旁和正常肝組織(尸<0．05)。免疫組化肝癌組織及癌旁組織中IL一8表達(dá)均高于正常肝臟組織，且肝癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織(P<0．05)。結(jié)論IL一8在肝癌組織中高表達(dá)，在肝癌的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用，其受體CXCR1、CXCR2mRNA的表達(dá)也相應(yīng)升高，可作為臨床診斷的新指標(biāo)及其治療的新靶點(diǎn)?！娟P(guān)鍵詞】肝腫瘤；白細(xì)胞介素8；免疫組織化學(xué)IL--8來(lái)源于巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝5．ATrcCCAA
3、AGACCCACTCAT．3；GAPDH上游引物為：5．細(xì)胞等，其生物活性是吸引和激活中性粒細(xì)胞，促進(jìn)中性粒細(xì)胞GAAGATGGTGATGGGATIT一3，下游引物為：5一CAAGCTYC-趨化、脫落，釋放溶酶體，加強(qiáng)炎癥保護(hù)、促進(jìn)T細(xì)胞趨化游走，CCGTrCTCAGCC-3。采用Trizol試劑提取總RNA，并檢測(cè)RNA加強(qiáng)免疫反應(yīng)J。越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)證明，IL-8及其受體在腫瘤的純度和濃度。取RNA2l，按照實(shí)時(shí)PCR試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的發(fā)生、發(fā)展中具有一定的影響和作用。本文擬對(duì)IL-8及其反應(yīng)獲得cDNA，并置于一
4、20℃保存、備用。檢測(cè)IL-8mRNA其配體與肝癌的關(guān)系作一初步探討。受體CXCR1、CXCR2mRNA表達(dá)的反應(yīng)體系共2O，其中DNA一染料SYBRGreenpremixExTaqTMU(2×)1O、引物各0．6l、、資料與方法1．一般資料：32例均為2008年：月至2011年12月本院住cDNA2以及dH206．8ILl，并設(shè)置IL-8，CXCR1，CXCR2和院患者，9例為肝良性腫瘤患者(無(wú)肝炎肝硬化等肝病基礎(chǔ))，其GAPDH各三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線判斷擴(kuò)增效率是否一致，余經(jīng)化驗(yàn)、超聲、CT確診，行肝切除術(shù)后
5、病理提示為肝細(xì)胞性肝并且每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)復(fù)空；免疫組化：ABC試劑盒分別購(gòu)自Vec—癌。男l(wèi)5例，女8例，年齡32～78歲，平均年齡為56．7歲。全tor公司，免疫組化操作步驟按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，顯微鏡下觀察部病例均有不同程度的肝病，術(shù)前均未接受包括經(jīng)肝動(dòng)脈栓塞染色強(qiáng)度，以PBS代替一抗做陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性切片為陽(yáng)性化療在內(nèi)的任何其他治療。對(duì)照。2．標(biāo)本來(lái)源：取腫瘤及癌旁約1cm外的肝組織，避開(kāi)壞死5．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件處理，所得結(jié)果以區(qū)，標(biāo)本置于液氮中保存，再置于一7O℃冰箱備用。部分用甲醛均數(shù)±
6、標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，進(jìn)行方差分析。P<0．05為差異有統(tǒng)固定，石蠟包埋，待免疫組化染色。全血于術(shù)前抽取6ml，然后計(jì)學(xué)意義。在4℃下、離心半徑為16em、3600r／min離心10min，收集血清，二、結(jié)果并置于一80℃保存、備用。1．血清中IL-8細(xì)胞因子的水平：原發(fā)性肝癌患者血清中3．主要實(shí)驗(yàn)試劑及儀器：Trizol試劑購(gòu)于Invitrogen公司；實(shí)IL．8的含量明顯高于對(duì)照組的患者，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)試劑盒購(gòu)于TaKaPa公司，IL-8酶聯(lián)免疫義(尸<0．05，圖1)。吸附試驗(yàn)(
7、ELISA)試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司。生化檢測(cè)儀購(gòu)自2．IL-8在肝癌組織中的表達(dá)：免疫組化檢測(cè)IL-8在肝癌組Olympus公司，ABIprism7300實(shí)時(shí)PCR儀購(gòu)自Aplliedbiosystem織中的表達(dá)，32例標(biāo)本中23例肝癌患者癌組織中的表達(dá)明顯高公司。Anti．IL-8兔抗人多克隆抗體購(gòu)自SantaCruz公司。于癌旁組織。9例對(duì)照組IL．8表達(dá)基本為陰性(P<0．05，圖2)。4．血清IL一8水平的測(cè)定：采用雙抗體夾心ELISA法，取3．IL．8mRNA及其配體CXCR1、CXCR2mRNA基因的表
8、一8O℃保存的血清，自然解凍后進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照達(dá)：原發(fā)性肝癌患者癌及癌旁組織中的IL-8mRNA及其配體說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；組織中IL．8mRNA及其受體CXCR1、CXCR2mRNACXCR1、CXCR2mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于正常對(duì)照組，組間比表達(dá)檢測(cè)：采用RT—PCR法，IL-8、CXCR1、CXCR2和GAPDH引較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
