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1、第37卷第3期中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)Vo1．37．NO．32015年3月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMar．2015doi：10．3969~．issn．1008-0589．2015．03．12基因C型鴨甲肝病毒競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)方法的建立何美琳，張煥容，程方明，楊曉農(nóng)1,2，岳華，f1．西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都610041；2．西南民族大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)四川I省高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都610041)摘要：為建立檢測(cè)基因c型鴨甲肝病毒(DHAV．c)血清抗體的方法，本研究以純
2、化的DHAV．C作為包被抗原，抗DHAV．C單克隆抗體(MAb)5E3—9與待檢血清競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原，采用方陣法確定包被抗原、MAb及待檢血清的最佳工作濃度，經(jīng)過對(duì)反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了DHAV．C抗體的競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法。該方法僅對(duì)DHAV—C血清檢測(cè)為陽性，與DHAV．A、鴨圓環(huán)病毒、鴨乙型肝炎病毒等相關(guān)病原的鴨陽性血清無交叉反應(yīng)。敏感性試驗(yàn)表明，標(biāo)準(zhǔn)陽性血清1：128倍稀釋時(shí)，檢測(cè)結(jié)果仍為陽性，比中和試驗(yàn)靈敏性更高。批內(nèi)批間變異系數(shù)分別為4．64％～5．21％和6．02％～8．68％，具有良好的重復(fù)性。與中和試驗(yàn)比較，陽性符合率為100％
3、(15／15)，陰性符合率為77．8％(14／181。本研究基于純化的DHAV．C及其特異性MAb建立的MAb競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法可以用于DHAv．C流行病學(xué)調(diào)查以及抗體的檢測(cè)。關(guān)鍵詞：基因C型鴨甲肝病毒；單克隆抗體；競(jìng)爭(zhēng)ELISA；抗體檢測(cè)中圖分類號(hào)：$852．65文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1008—0589(2015)03—02l1-05DevelopmentofacompetitiveELISAfordetectingantibodiesagainstgenotypeCduckhepatitisAvirusbasedonthemonocl
4、onalantibodyHEMei-lin，ZHANGHuan—rong，，CHENGFang—ming，YANGXiao-nong，，YUEHua’(1．CollegeofLifeScienceandTechnology，SouthwestUniversityforNationalities，Chengdu610041，China；2．KeyLaboratoryofVeterinaryMedicineofUniversityinSichuanProvince，SouthwestUniversityforNationalities，Chengd
5、u610041，China)Abstract：TheobjectiveofthisstudyistodevelopacompetitiveELISAtodetecttheantibodyagainstduckhepatitisAvirusgenotypeC(DHAV—C)．ThepurifiedDHAV-Cwasusedascoatingantigen，andDHAV—CspecificMAb5E3-9ascompetitiveantibodyagainstDHAV-Cantibody．Undertheoptimizedreactingcond
6、itions，including10mLpurifiedDHAV—Ccoatingantigen，1：800dilutionofMAb5E3—9dilutingthetestserl／mto1：2ratio，and1：5，000dilutionofHRPconjugatedgoatanti-miceIgGwiththepositivecut-ofvalueofinhibitionratio36．86％．Thespecificitytestshowedthattherewerenocrossreactionwithduckanti—seraofa
7、lltestedrelativepathogens，suchasduckhepatitisAvirusgenotypeA(DHAV—A)，duckcircovirus，duckhepatitisBvirusandother6pathogens．Thesensitivitytestshowedthat1：64dilutedDHAV—CpositiveseracouldbedetectedpositivewiththisdevelopedcompetitiveELISA．The15neutralizationtestdetectedpositive
8、serawereallpositivewhentheyweredetectedbythedevelopedcompetitiveELISA，while
