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《水稻乙醇酸氧化酶基因OsGLO1的原核表達及多克隆抗體制備.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第31卷第3期華南農(nóng)業(yè)大學學報Vo1．31．No．32010年7月JournalofSouthChinaAgriculturalUniversityJu1．2010水稻乙醇酸氧化酶基因OsGLO1的原核表達及多克隆抗體制備張建軍，胥華偉，周曉垂，王玉琪，彭新湘(1華南農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，分子植物生理研究室，廣東廣州510642；2河南科技大學農(nóng)學院，河南洛陽471003)摘要：乙醇酸氧化酶是光呼吸代謝的關(guān)鍵酶．以水稻Oryzasativa葉片cDNA為模板，利用RT—PCR擴增水稻乙醇酸氧化酶基因(O
2、sGLO1)，并構(gòu)建了該基因的原核表達載體pET23d—OsGLO1，轉(zhuǎn)化E．coliBI21(DE3)，經(jīng)IPTG誘導表達融合蛋白．以純化的OsGLO1融合蛋白為抗原免疫新西蘭白兔，制備兔抗OsGLO1的多克隆抗體．Western—blot分析表明，制備的多克隆抗體能有效地檢測水稻、菜心Brassicacampestris、擬南芥Arabidopsisthaliana和菠菜Spinaciaol—eracea中乙醇酸氧化酶的表達，為進一步深入研究乙醇酸氧化酶在調(diào)控光呼吸及抗逆性等方面的作用奠定了基礎．關(guān)
3、鍵詞：水稻；乙醇酸氧化酶；原核表達；多克隆抗體中圖分類號：Q945．11文獻標識碼：A文章編號：1001—411X(2010)03一O113—03ProkaryoticExpressionandPreparationofPolyclonalAntibodyofGlycolateOxidaseGeneOsGLO1fromRiceZHANGJian-jun，XUHua．wei，ZHOUXiao．chui，WNAGYu—qi，PENGXin—xiang(1LaboratoryofMolecularPlantP
4、hysiology，CollegeofLifeSciences，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China；2CollegeofAgriculture，HenanUniversityofScienceandTechnology，Luoyang471003，China)Abstract：Glycolateoxidase(GLO)isakeyenzymeinphotorespiratorymetabolism．OsGLO1wasampli—f
5、ledbvRT—PCRfromriceleafcDNAandclonedintoaprokaryoticexpressionvectorpET23d．Therecom．binantplasmidwastransformedintoEscherichiacolBL21(DE3)andtheexpressionofrecombinantpro—teinwasinducedbvIPTG．erpurification．itwasusedastheantigentoimmunearabbitandthenpoly
6、—clonalantibodywasobtained．Western．blotanalysisconfirmedthatthepolyclonalantibodywasabletorecognizetheGLOproteinsfromdifferentplantspecies，suchasrice，cabbage，arabidopsisandspinach．ThisworklaidafoundationforfunctionalstudiesofGLOinregulatingphotosynthesis
7、understresses．Keywords：rice；glycolateoxidase；prokaryoticexpression；polyclonalantibody乙醇酸氧化酶(Glycolateoxidase，GLO)是光呼的基因，華南農(nóng)業(yè)大學分子植物生理實驗室利用誘吸代謝的關(guān)鍵酶1-3]，GLO催化乙醇酸氧化生成乙醛導反義RNA技術(shù)研究了水稻乙醇酸氧化酶基因酸，也可以催化乙醛酸氧化生成草酸¨J．自1948年(OsGLO1)的表達，發(fā)現(xiàn)GLO活性的下調(diào)會導致光合蘇聯(lián)學者首次報道GLO以來，對GL
8、O的研究主要集速率的下降，且二者呈明顯的線性關(guān)系J，說明G中在其分子結(jié)構(gòu)和催化特性方面剖．光呼吸途徑中LO1是調(diào)控GLO的關(guān)鍵基因之一．為了深入研究通過GLO反應產(chǎn)生大量H：O，HO：在植物信號轉(zhuǎn)GLO的功能，本研究構(gòu)建了OsGLO1的原核表達載導及誘導抗逆性等方面都具有重要作用；生物信體，在大腸桿菌中表達并純化后免疫新西蘭白兔，制息學的分析表明，水稻中存在著多個可能編碼GLO備相應的多克隆抗體，以水稻Oryzasativa、擬南芥收稿日期
