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《水稻SDG723蛋白C末端原核表達(dá)及多克隆抗體制備.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)2012年第21期l51水稻SDG723蛋白C末端原核表達(dá)及多克隆抗體制備林欣欣，張志剛，李超，梁杰文’，杜平州，王玉琪，(1．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510642；2．廣東省農(nóng)業(yè)生物蛋白質(zhì)功能與調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510642)摘要：水稻SDG723蛋白含有植物組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶保守的SET結(jié)構(gòu)域。選取其抗原決定簇較密集的C末端進(jìn)行原核表達(dá)，通過(guò)構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a一723C，轉(zhuǎn)化EcoliBL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白后進(jìn)行純化。以純化的融合蛋白為抗原免疫新西
2、蘭白兔，制備多克隆抗體。Western—blot分析表明，制備的多克隆抗體能有效地檢測(cè)抗原的表達(dá)，為進(jìn)一步深入研究SDG723蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)關(guān)鍵詞：水稻；SDG723；原核表達(dá)：多克隆抗體中圖分類號(hào)：Q785文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1004—874X(2012)21-0151—03ProkaryoticexpressionandpreparationofpolyclonalantibodyofSDG723CterminalfromriceLINXin—xin，ZHANGZhi—gang，LIChao，LIANGJ
3、ie-wen，DUPing-zhou，WANGYu-qi，(1．CollegeofLifeSciences，SouthChinaAgricultura!University,Guongzhou510642，China；2．GuangdongProvincialKeyLaboratoryofProteinFunctionandRegulationinAgriculturalOrganisms，Guangzhou510642，China)Abstract：RiceSDG723containedSETdomain，which
4、wasconservedinplanthistonemethyltransferase．Inthisstudies，theprokaryoticexpressionvectorofSDG723CterminalfpET28a一723C1wasconstructed，andtherecombinantplasmidwastransformedintoEcolBI21fDE31andtheexpressionofrecombinantproteinwasinducedbyIG．Atierpurification，itwas
5、usedastheantigentoimmunearabbitandthenpolyclonalantibodywasobtained．Western—blotanalysisconfirmedthatthepolyclonalantibodywasabletorecognizetheantigen．whichwasexpressedinE．coli．ThisworklaidafoundationforfunctionalstudiesofSDG723．Keywords：rice；SDG723；prokaryotice
6、xpression；polyclonalantibody由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(HistoneMethyhransferase，白進(jìn)行Western—blot檢測(cè)，結(jié)果表明該抗體的特異性很強(qiáng)，HMT)催化的組蛋白甲基化修飾是一種重要的表觀遺傳調(diào)為進(jìn)一步研究SDG723蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)?？貦C(jī)制。目前已經(jīng)在植物中發(fā)現(xiàn)了多種催化不同組蛋白賴1材料與方法氨酸甲基化的酶，它們均含有在進(jìn)化上非常保守的由約130個(gè)氨基酸形成的SETfSu(var)3—9，Enhancerofzeste，1．1試驗(yàn)材料Trithorax]結(jié)構(gòu)域，從而
7、構(gòu)成了SET結(jié)構(gòu)域蛋白家族(SET限制性內(nèi)切酶、T4DNA連接酶、TaqDNA聚合酶、DomainGroup．SDG)[”。根據(jù)不同植物中含有SET結(jié)構(gòu)域蛋dNTPMixture、pET28a載體試劑盒等購(gòu)自TaKaRa公司；白的N端及C端特點(diǎn)，可將SDG家族蛋白分為7類圜。水DNAMarker、瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒等購(gòu)自廣州英稻SDG723(0srX1)屬于家族Ⅲ(Trithorax家族)，該家族蛋韋創(chuàng)津生物科技有限公司；PCR引物合成和序列測(cè)定由白具有H3K4甲基轉(zhuǎn)移酶的活性。在擬南芥中，Trithorax家
8、北京奧科鼎盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司完成；弗氏完全佐族的成員有ATX(ArabidopsisTrithorax)和ATXR(Arabid—?jiǎng)⒏ナ喜煌耆魟?、氨芐青霉素、堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗opsisTrithoraxRelated)。擬南芥中ATX1的缺失突變(atx1)兔二抗為Sigma公司產(chǎn)品；Ni—NTAHis結(jié)合樹(shù)脂為會(huì)導(dǎo)致
