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《沙門菌外膜蛋白D的原核表達(dá)及多克隆抗體制備.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、生物技術(shù)通訊??一-一，LETTERSINBIOTECHNOLOGYVol．·21No．·4Jut．‘，．2010497doi：10．3969／j．issn．1009—0002．2010．04．O11研究報(bào)告沙門茵外膜蛋白D的原核表達(dá)及多克隆抗體制備郭曉雅，師長(zhǎng)宏，邵成，趙勇，史皆然第四軍醫(yī)大學(xué)a．西京醫(yī)院呼吸內(nèi)科；b．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；陜西西安710032[摘要]目的：在大腸桿菌中表達(dá)沙門菌外膜蛋白(OMP)D，純化后制備兔抗OMPD抗體。方法：用PCR方法從鼠傷寒沙門菌中擴(kuò)增出ompD基因，并插入融合表達(dá)載體pET一28a(+)的多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)一o
2、mpD；以重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，篩選陽(yáng)性重組菌株，經(jīng)IG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)，在變性條件下對(duì)目的蛋白進(jìn)行親和層析純化；以表達(dá)的0MPD蛋白免疫家兔，制備抗OMPD的多克隆抗體并進(jìn)行鑒定。結(jié)果：擴(kuò)增了ompD基因，測(cè)序證實(shí)正確后亞克隆于表達(dá)載體pET一28a(+)中，經(jīng)PCR篩選和酶切鑒定獲得陽(yáng)性克隆，經(jīng)誘導(dǎo)在大腸桿菌中表達(dá)出相對(duì)分子質(zhì)量為40xlO。的目的蛋白并進(jìn)行純化；純化的OMPD免疫家兔后，能有效地刺激特異性抗體的產(chǎn)生，抗血清的效價(jià)達(dá)到1：10000以上，且具有良好的特異性。結(jié)論：構(gòu)建ompD基因的原核表達(dá)載體，并在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)；制備出兔抗OMPD抗
3、體，效價(jià)及特異性均良好，為進(jìn)一步制備腸黏膜高親和力疫苗奠定了基礎(chǔ)。[關(guān)鍵詞]外膜蛋白D；沙門菌；原核表達(dá)；多克隆抗體[中圖分類號(hào)]Q78；R392．1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1009—0002(2010)O4—0497—04ProkaryoticExpressionofSalmonellaOuterMembraneProteinDandDevelopmentofitsPolyclonalAntibodyGUOXiao—Y，SHIChang-Hong~,SHA0Cheng~,ZHA0Yon，SHIe—Ranaa．RespiratoryMedicineDepartmentofXi
4、jingHospital；b．LaboratoryAnimalCenter；FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi"an710032，China[Abstract]Objective：ToobtainSalmonellaoutermembraneprotein(OMP)DexpressedinE．coliBL21(DE3)forproducingitspolyclonalantibody．Methods：TheompDgeneamplifiedfromS．typhimuriumbyPCRwasinsertedintoexpressionplasmid
5、pET-28a(+)toconstructrecombinantplasmidpET一28a(+)一ompD．Therecombinantplas—midwastransformedintoE．coliBL21(DE3)fortheexpressionOMPDunderIPTGinduction．TheproteinOMPDwaspurifiedwithNi+-NTAsystemandusedtoimmunizerabbitstoprepareanti—OMPDantibody，andtheanti—body'spropertieswereidentified．Results：T
6、heSalmonellaompDgenewasconfirmedbyDNAsequencing，andpositiverecombinantcloneswereidentifiedbyrestrictionenzymedigestionanalysisandDNAsequencing．Afterin—ductionwithIPTG，OMPDwithMrbeing40kDawasexpressedinE．coliBI21(DE3)andwaspurified．Rabbitpolyclonalantibodywithagoodspecificitywasobtained，andthe
7、titerwasaboveof1：10000．Conclusion：TherecombinantexpressionplasmidofOMPDwasconstructedsuccessfullyandexpressedinE．coli．Thepreparedrab—bitanti—OMPDantibodyhadahightiterandspecificity，whichlaidafoundationforthepreparationofintestinalmucosaimmuno
