間歇低氧對(duì)大鼠肝臟氧化應(yīng)激損傷的研究.pdf

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1、·250·中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥2013年l2月第8卷第34期ChinaPracMed，Dec2013，Vo1．8，No．34間歇低氧對(duì)大鼠肝臟氧化應(yīng)激損傷的研究張禎董麗霞李碩周偉萬(wàn)南生王志強(qiáng)【摘要】目的通過(guò)建立大鼠模型并測(cè)定間歇低氧及持續(xù)低氧大鼠肝臟中過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)水平，探討睡眠呼吸暫停模式間歇低氧對(duì)大鼠肝臟氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制。方法雄性Wistar大鼠96只，隨機(jī)分為3組：間歇低氧組(IH)，持續(xù)低氧組(CH)和常氧對(duì)照組(SC)。分別于暴露第2、4、6、8周隨機(jī)抽取8只大鼠麻醉處死，留取肝臟組織，應(yīng)用化學(xué)比色方法檢測(cè)大鼠肝臟MDA水平

2、。結(jié)果大鼠肝臟MDA含量IH組明顯高于CH組和sc組(均P<0．01)，IH及CH組MDA水平隨暴露時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加。結(jié)論睡眠呼吸暫停模式間歇低氧能引起大鼠肝臟發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)而導(dǎo)致肝損傷，其損傷程度比持續(xù)低氧更為嚴(yán)重，且隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加?！娟P(guān)鍵詞l間歇低氧；氧化應(yīng)激；肝損傷阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(obstructivesleepap—組織勻漿液待測(cè)標(biāo)本中MDA含量，測(cè)定試劑盒購(gòu)自于南京建neahypopneasyndrome，OSAHS)可引發(fā)冠心病、高血壓、高脂成生物工程研究所，操作方法嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。血癥和肝腎功能障礙

3、等多器官的損害，其病理生理學(xué)基礎(chǔ)是1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，慢性間歇低氧(chronicintermittenthypoxia，cm)?。目前有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-4-s)表示，組間及不同檢測(cè)時(shí)點(diǎn)研究認(rèn)為間歇低氧可引起肝臟細(xì)胞呈現(xiàn)氧化應(yīng)激狀態(tài)而導(dǎo)致間比較采用單因變量多因素方差分析。P<0．05表示差異有肝損傷。本研究模擬人OSAHS建立慢性間歇低氧大鼠動(dòng)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。物模型，動(dòng)態(tài)比較間歇低氧和持續(xù)低氧干預(yù)對(duì)大鼠肝臟中脂2結(jié)果質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)變化的影響，探討其肝臟損傷的實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，3組大鼠全部

4、存活。間歇低氧組(IH)及持機(jī)制。續(xù)低氧組(OH)與常氧對(duì)照組(sc)大鼠肝臟MDA含量比較，1材料和方法各組之間及各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)(2W，4W，6W，8W)肝組織勻漿中1．1實(shí)驗(yàn)分組及暴露處理雄性Wister大鼠96只，隨機(jī)分MDA含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<它0i．0董1，I薹H耋組MDA含量顯為3組，每組32只，分別置于相同的自制動(dòng)物飼養(yǎng)艙中。實(shí)著高于CH組及sc組，IH組及CH組MDA含量隨暴露時(shí)間驗(yàn)對(duì)照組(sc)以空氣(21％0：)5L／min持續(xù)充入飼養(yǎng)艙；持延長(zhǎng)而呈上升趨勢(shì)。見(jiàn)圖1，表1。續(xù)低氧組(CH)以低氧混合氣(10％0：)

5、5L／rain持續(xù)充入飼養(yǎng)艙；間歇低氧組(IH)給予低氧(10％0：)／復(fù)氧(21％0)循環(huán)處理，每120s循環(huán)充入壓縮空氣和純氮，使艙中氧濃度30s內(nèi)從21％降至10％，40s內(nèi)再次恢復(fù)至21％，后維持常氧直至下個(gè)循環(huán)。各組大鼠每天暴露8h(9：00am～5：00pm)，8h以外室內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。分別于實(shí)驗(yàn)暴露2周、4周、6周、8周末，從各組隨機(jī)抽取8只大鼠，清晨空腹，麻醉后股動(dòng)脈放血處死，迅速解剖分離肝臟組織，制成肝組織勻漿并離心取上清液，測(cè)定各樣本蛋白濃度并標(biāo)定稀釋至同一總蛋白濃度，液氮瓤，■速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存待測(cè)。圖1不同低氧程

6、度和時(shí)間大鼠肝臟MDA含量變化1．2大鼠肝臟MDA測(cè)定采用化學(xué)比色法測(cè)定各標(biāo)定后的表1不同組別大鼠肝臟MDA含量變化(nmol／mgprot，x±s)注：縱向比較各組與cH組比較P

7、表現(xiàn)為周期性的反復(fù)缺氧／再氧合循環(huán)，可導(dǎo)致活性氧簇子的參與，使整個(gè)炎癥反應(yīng)過(guò)程呈現(xiàn)級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)。有研(reactiveoxygenapeeies，ROS)的產(chǎn)生，而后ROS介導(dǎo)的全身究認(rèn)為肝臟氧化應(yīng)激產(chǎn)生的ROS和過(guò)氧化物激活NF．KB和和細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)，引起一系列的級(jí)聯(lián)炎癥反應(yīng)，臨床上NF-KB介導(dǎo)的炎癥通路，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的肝臟損傷。本實(shí)最終發(fā)生OSAHS的多器官損傷。法國(guó)學(xué)者Tanne等曾首驗(yàn)研究結(jié)果表明間歇低氧及持續(xù)低氧均可引起脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)先報(bào)道OSAHS是脂肪型肝炎的危險(xiǎn)因素，Savransky等美物丙二醛的明顯增加，從而導(dǎo)致肝

8、損傷，而嚴(yán)重的間歇低氧比國(guó)學(xué)者在一系列動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也證實(shí)了在脂代謝紊亂的基礎(chǔ)上持續(xù)低氧會(huì)對(duì)肝組織造成更加嚴(yán)重的損害，分析其原因可能是因?yàn)榕c持續(xù)低氧比較，間歇低氧以周期性的再氧合為特