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《牛蒡子苷元對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖的影響及相關(guān)機(jī)制.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、·726·安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jun；49(6)牛蒡子苷元對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖的影響及相關(guān)機(jī)制陸明，姬飛虹，張林杰O摘要目的研究牛蒡子苷元(ATG)對(duì)刀豆蛋白A(ConA)誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖和相關(guān)細(xì)胞因子分泌的影響及其可能的分子機(jī)制。方法MTF法檢測(cè)ATG對(duì)小鼠脾細(xì)胞的毒性；H3一胸腺嘧啶核苷摻入法檢測(cè)ATG對(duì)小鼠脾細(xì)胞的增殖抑制水平；ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子干擾素(IFN一)和白介素2(IL-2)的分泌水平；Westernblot法
2、檢測(cè)mTOR通路相關(guān)蛋白(mTOR、P70S6K、Akt、AMPK、Raptor)的表達(dá)及磷酸化水圖1Arctigenin結(jié)構(gòu)平。結(jié)果ATG對(duì)小鼠脾細(xì)胞無(wú)顯著毒性；ATG顯著抑制了ConA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖；ATG顯著減少了小鼠脾細(xì)海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；PRMI1640細(xì)胞培養(yǎng)胞上清液中淋巴因子IFN．和IL一2的含量，且具有濃度依賴基購(gòu)于美國(guó)Gibco公司；青霉素、鏈霉素、吐溫20、性；ATG顯著降低了mTOR和P70S6K的磷酸化水平，增加完全蛋白酶抑制劑、細(xì)胞裂解液、麗春紅、二甲基亞了上游
3、AMPK和Raptor的磷酸化，而Akt的磷酸化水平?jīng)]有明顯變化。結(jié)論ATG可顯著抑制ConA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)砜(DMSO)均購(gòu)于美國(guó)Sigma—Aldrich公司；ELISA胞增殖并減少I(mǎi)FN-．',／、IL一2的分泌，該作用可能與其增強(qiáng)試劑盒購(gòu)于上海依科賽公司；BCA蛋白定量試劑盒AMPK、Raptor的磷酸化，抑制mTOR、P70S6K的磷酸化有購(gòu)于美國(guó)Thermo公司；GAPDH抗體購(gòu)于華安生物關(guān)。公司；AMPK、P—AMPK、Raptor、p-Raptor、mTOR、關(guān)鍵詞牛蒡子苷元；細(xì)胞增殖
4、；IL一2；IFN一；mTORP—mTOR、P70S6K、p-P70S6K、Akt、p-Akt抗體均購(gòu)于中圖分類號(hào)R285．5；R329．25美國(guó)CellSignalingTechnology公司；蛋白預(yù)染Mark-文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號(hào)1000—1492(2014)06—0726—05er、一抗稀釋液、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗、ECL化學(xué)發(fā)光液購(gòu)于碧云天公司；硝酸纖維素膜購(gòu)于美牛蒡子在中國(guó)傳統(tǒng)中藥中具有抗炎利尿排毒的國(guó)Millipores公司。作用?，而其單一化合物提取物牛蒡子苷(arctiin，1．
5、2方法AC)或牛蒡子苷元(Arctigenin，ATG，圖1)亦具有免1．2．1BALB／c小鼠脾細(xì)胞原代培養(yǎng)配制含疫抑制功能和抑癌功能J，但ATG的免疫抑制機(jī)10％胎牛血清、110mg丙酮酸鈉、20mmol／L制尚不明確。mTOR作為一種保守的絲／蘇氨酸激HEPES、100U／ml青霉素、0．1mg／ml鏈霉素的1L酶，可以促進(jìn)細(xì)胞蛋白質(zhì)的翻譯并促進(jìn)細(xì)胞從G．期PRMI1640培養(yǎng)液(pH7．2)。處死6～8周小鼠取進(jìn)入s期，與細(xì)胞增殖、生存和代謝密切相關(guān)，并參與了免疫細(xì)胞激活和增殖J。該研究通過(guò)觀
6、察脾臟，置于冷PBS中，研磨，過(guò)200目篩網(wǎng)，1200r／min離心5min，去上清液，沉淀加入紅裂液1ml／ATG對(duì)小鼠原代脾細(xì)胞的作用，檢測(cè)roTOR通路的脾，混勻，靜置1min，加入PBS離心，再加入PBS，過(guò)相關(guān)改變，探索ATG的免疫抑制機(jī)制。膜，1200r／min離心5min，所剩細(xì)胞洗滌1～2次，11材料與方法ml1640打散離心后的沉淀(10l細(xì)胞懸液+190l臺(tái)盼藍(lán)，取10l計(jì)數(shù))。1．1材料ATG購(gòu)于上海源葉生物；雷帕霉素(ra—1．2．2MTF測(cè)ATG的細(xì)胞毒性用RPMI1640將
7、pamycin，RAPA)購(gòu)于上海生工；BALB／c小鼠購(gòu)于上小鼠原代脾細(xì)胞調(diào)成4X10。個(gè)／ml，在96孔板中，2014一叭一15接收每孔加100l細(xì)胞懸液(4X10個(gè)細(xì)胞)，501培基金項(xiàng)目：安徽省教育廳自然科學(xué)基金(編號(hào)：KJ2011A167)養(yǎng)液和50txlATG(終濃度為200、100、50、25、12．5、作者單位：‘安徽醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)教研室，合肥2300326．25ixmol／L，RPMI1640溶解，對(duì)照組為培養(yǎng)液)，上海市勤浩生物科技有限公司，上海201203各濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孑L，另設(shè)
8、置3個(gè)不加細(xì)胞和藥物(用作者簡(jiǎn)介：陸明，男，碩士研究生；培養(yǎng)基替代)的調(diào)零孔，37℃、5％CO孵箱中培養(yǎng)張林杰，男，教授，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E—mail：zlj33@ahmu．edu．cn48h，培養(yǎng)結(jié)束前4h加20lMTT(母液5mg／m1)，·730·安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jun；49(6)應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選轉(zhuǎn)染CDX2基因后胃癌細(xì)胞差異表達(dá)基因陳曉雙，秦蓉，儲(chǔ)婧，陳宗科摘要目
