總糖的測定方法.doc

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1、鐵氰化鉀滴定法準(zhǔn)確稱取經(jīng)105℃烘干并冷卻之后的樣品5.000g，用少量水溶解并移入500ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。取出此液50ml于100ml容量瓶中，加鹽酸5ml搖勻，置65～70℃水浴上加溫30min，取出，迅速冷卻至室溫。用30%氫氧化鈉溶液中和，加水至刻度，搖勻，倒入滴定管中。吸取已配制好的鐵氰化鉀溶液5ml于150ml三角瓶中，加入2.5ml10%氫氧化鈉溶液、12.5ml水和潔凈的玻璃珠數(shù)個，于石棉網(wǎng)上加熱至沸騰，保持1min。然后加入次甲基藍(lán)指示劑1滴，立即以樣品液滴定至藍(lán)色消失為止，記錄用量。正式滴定時，先加入比預(yù)

2、實(shí)驗(yàn)少0.5ml的樣品液，煮沸1min，加入次甲基藍(lán)指示劑1滴，再用樣品液滴定至無色。按下述公式計(jì)算鐵氰化鉀的濃度：式中C：相當(dāng)于5ml鐵氰化鉀溶液的轉(zhuǎn)化糖的重量(g)；V：滴定時消耗樣品液的體積(ml)；W：稱取的樣品重量(g)；0.95：換算系數(shù)（1g蔗糖可轉(zhuǎn)化為0.95g轉(zhuǎn)化糖）稱取樣品5～10g（視含糖量多少而增減），用200ml左右的水洗入250ml容量瓶內(nèi)（樣品中如含有較多的蛋白質(zhì)、色素、膠體等可逐漸加入20%醋酸鉛溶液10～15ml，至沉淀完全為止。并加入10～15ml10%磷酸二氫鈉溶液，至不再產(chǎn)生沉淀為止）。加水至刻度，搖勻

3、過濾。吸取濾液50ml于100ml容量瓶中，按上述鐵氰化鉀標(biāo)定方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化、中和及滴定（以樣液代替糖液，其余操作相同）。按下述公式計(jì)算總糖含量：式中A：相當(dāng)于5ml鐵氰化鉀溶液的轉(zhuǎn)化糖的重量(g)；V：滴定試樣液消耗體積(ml)。蒽酮比色法測總糖實(shí)驗(yàn)五總糖的測定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法測定可溶性糖含量的原理和方法。2.學(xué)習(xí)植物可溶性糖的一種提取方法。二、原理：糖類在較高溫度下可被濃硫酸作用而脫水生成糠醛或羥甲基糖醛后，與蒽酮(C14H10O)脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍(lán)綠色。該物質(zhì)在620nm處有最大吸收，在150μg/ml

4、范圍內(nèi)，其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。這一方法有很高的靈敏度，糖含量在30μg左右就能進(jìn)行測定，所以可做為微量測糖之用。一般樣品少的情況下，采用這一方法比較合適。三、儀器、試劑和材料1.儀器：電熱恒溫水浴鍋，分光光度計(jì)，電子天平，容量瓶，刻度吸管等2.試劑：(1)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：l00μg/ml(2)濃硫酸(3)蒽酮試劑：0.2g蒽酮溶于100ml濃H2SO4中。當(dāng)日配制使用。3.材料：甜糜秸稈四、操作步驟1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取7支大試管，按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖溶液：管號1234567葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ml）00.10.20.

5、30.40.60.8蒸餾水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（μg）0102030406080在每支試管中立即加入蒽酮試劑4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸l(wèi)0min取出，用冰浴冷卻至室溫，在620nm波長下以第一管為空白，迅速測其余各管吸光值。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量（μg）為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.植物樣品中可溶性糖的提?。簩悠芳羲橹?mm以下，105oC烘干至恒重，精確稱取1~5g，置于50ml三角瓶中，加沸水25m1，加蓋，超

6、聲提取10min，冷卻后過濾（抽濾），殘?jiān)梅姓麴s水反復(fù)洗滌并過濾（抽濾），濾液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。3.稀釋：吸取提取液2m1，置于另一50m1容量瓶中，以蒸餾水稀釋定容，搖勻。4.測定吸取1ml已稀釋的提取液于試管中，加入4.Oml蒽酮試劑，平行三份；空白管以等量蒸餾水取代提取液。以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。根據(jù)A620平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡萄糖的含量（μg）。五、結(jié)果處理C×V總×D樣品含糖量（%）=─────────────×100W×V測×106其中：C——在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的糖含量（μg），V總——提取液總體積

7、（ml），V測——測定時取用體積（ml），D——稀釋倍數(shù)，W——樣品重量（g），106——樣品重量單位由g換算成μg的倍數(shù)六、注意事項(xiàng)：該法的特點(diǎn)是幾乎可測定所有的碳水化合物，不但可測定戊糖與已糖，且可測所有寡糖類和多糖類，包括淀粉、纖維素等（因?yàn)榉磻?yīng)液中的濃硫酸可把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)），所以用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實(shí)際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細(xì)致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應(yīng)用價值，但在測定水溶性碳水化合物時，則應(yīng)注意切勿將樣品的未溶解殘?jiān)尤敕磻?yīng)液中，

8、否則會因?yàn)榧?xì)胞壁中的纖維素、半纖維素等與蒽酮試劑發(fā)生反應(yīng)而增加了測定誤差。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五