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《原核表達(dá)dsRNA抗番木瓜畸形花葉病毒的研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、熱帶作物學(xué)報(bào)2014，35(7)：1416—1423ChineseJournalofTropicalCrops原核表達(dá)dsRNA抗番木瓜畸形花葉病毒的研究張濤．一，沈文濤，言普z，黎小瑛，周鵬-，2I。1海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院．海南?？?702282中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所．海南海口5711013中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心．海南?？?71101摘要番木瓜畸形花葉病毒(Papayaleafdistortionmosaicirus．PLDMV)是一種已對(duì)番木瓜種植業(yè)構(gòu)成潛在威脅的新型病害。在轉(zhuǎn)基因植物備受爭(zhēng)
2、議的背景下．利用原核表達(dá)的dsRNA來(lái)防控病毒的策略不失為一種新的選擇。本文選取PLDMVcP基因全長(zhǎng)(879bp)，運(yùn)用OZ—LIC法構(gòu)建了含有pdk內(nèi)含子的ihpRNA結(jié)構(gòu)。將其嵌入原核表達(dá)載體pSP73中．并轉(zhuǎn)化RNasem缺陷型大腸桿菌M—JmlO9LacY．構(gòu)建了1種能高表達(dá)dsRNA的原核表達(dá)菌株M-Jm109LacY—CP879．以終濃度為0．4mmol／LIPTG誘導(dǎo)后能夠穩(wěn)定高效的表達(dá)CP879一dsRNA。研究共設(shè)2個(gè)處理：保護(hù)性處理與治療性處理。分別用含有CP879一dsRNA的粗提液對(duì)這
3、2個(gè)處理的番木瓜植株進(jìn)行噴施處理，通過(guò)統(tǒng)計(jì)發(fā)病率、觀察病癥變化以及ELISA分析結(jié)果表明，保護(hù)性處理能有效抑制番木瓜畸形花葉病毒的侵染，主要表現(xiàn)為發(fā)病時(shí)間推遲和相對(duì)較低的發(fā)病率：治療性處理植株的病毒積累量會(huì)在噴施后第3～12天內(nèi)出現(xiàn)暫時(shí)性的降低。結(jié)果表明，保護(hù)效果優(yōu)于治療效果，若每月噴施2—3次dsRNA粗提液，有望能夠有效地預(yù)防PLDMV的侵染關(guān)鍵詞番木瓜畸形花葉病毒；原核表達(dá)；dsRNA；RNA沉默中文分類號(hào)$667．97文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼AdsRNAofProkaryoticExpressionforResist
4、ancetoPapayaLeafDistortionMosaicVirusZHANGTao，SHENWentao，YANPu，LIXiaoying，ZHOUPeng工1c0ofAgriculture，HainanUniversity,Haikou,Hainan571101，China2Imtit~eofTropicalBioscienceandBiotechnology,CATAS,Haikou,Hainan571101，China3Analysis＆testingcente5CATAS,H~kou,Haina
5、n571101．ChinaAbstractPapayaledistortionmosaicvirus(PLDM、7)isapotentialthreattopapayacultivation．Nowaday~transgenicplantsishighlycontrovemial，andusingtheprokaryoticexpresseddsRNAtocontroltheviruscouldbeanewchoice．Thefu11lengthofPLDMVCPgenef879bp1waschosentoco
6、nstructahairpinRNAstructurewhichcontainspdkintronbyOZ—LICmethod．AfterthecodingstructureofhairpinRNAinse~edintotheprokaryoticexpressionplasmidofpSP73．therecombinantvectorwastransformedintotheRNasem—deficientEscherichiacolstrainofM-Jm109LacY．Thenaprokaryoticex
7、pressionstrainwithhighexpressionlevelofCP879一dsRNAwassuccessfullyconstructed．namedM-Jml09LacY—CP879．TherecombinantEcolstraincouldexpressCP879一dsRNAstablywheninducedwithIPrGat0．4mmol／L．Therearetwoassaysinthisstudy：aprotectiveresistanceassayandatIlerapeuticres
8、istanceassay．Intheprotectiveassay。CP879一dsRNAwasusedtosprayontotheplantleavesbeforeinoculationofPLDMV．Thediseaseincidence，symptomchangeandELISAanalysisresultsrevealedthattheCP879一dsRNAcouldinhib
