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1、改良Masson三色染色法在膠原纖維中的應(yīng)用中華首席醫(yī)學(xué)網(wǎng)????2006年05月24日11:05:41Wednesday??648作者：王玨,朱禮國(guó)，唐幕湘,張健《鄖陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》2006年2月25卷1期實(shí)驗(yàn)技術(shù)??加入收藏夾????【關(guān)鍵詞】?膠原纖維???[關(guān)鍵詞]?改良；Masson三色染色法；膠原纖維????目前，Masson三色染色法仍是膠原纖維染色的主要方法之一。它在臨床外檢和科研教學(xué)等方面有著重要的意義。在實(shí)際工作中，我們認(rèn)為傳統(tǒng)的Masson三色染色法[1]操作程序多，染色效果欠佳，且不太穩(wěn)定，對(duì)其做了改進(jìn)，現(xiàn)將做法介紹如下。 1?方
2、法 1.1?染液的配制 Harris蘇木素、1%鹽酸酒精、麗春紅酸性品紅、1%磷鉬酸、2%苯胺藍(lán). 1.2?染色方法? 石蠟切片3~4μm脫蠟至水,Harris蘇木素染3min流水沖洗,1%的鹽酸酒精分化3~5s流水沖洗,溫水返藍(lán)1min流水沖洗,麗春紅酸性品紅加溫染3min，蒸餾水沖洗,1%磷鉬酸分化1min，不洗，擦凈載玻片上的磷鉬酸殘液，2%苯胺藍(lán)復(fù)染1min，95%的酒精沖洗，95%酒精及無(wú)水酒精脫水，冷風(fēng)吹干，中性樹(shù)膠封片?！ ??結(jié)果 膠原纖維呈藍(lán)色，肌纖維胞質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)褐色?！ ??討論 通過(guò)長(zhǎng)期實(shí)踐探索，我們摸索出一種
3、程序更簡(jiǎn)潔、組織著色效果更好，且性能穩(wěn)定的改良Masson三色染色法。其原理是利用蘇木素，酸性品紅和苯胺藍(lán)對(duì)結(jié)締組織和神經(jīng)嗜銀顆粒、膠原纖維等組織染色，使時(shí)間縮短，步驟簡(jiǎn)便。改進(jìn)后的方法，將傳統(tǒng)的Masson三色染色法作了如下調(diào)整和改動(dòng)：Bowin氏液由10%中性固定液[2]代替，省略了0.5%碘酒精作用10min，5%硫代硫酸鈉作用5min和1%冰醋酸處理1min及地衣紅染30~60min等過(guò)程，然后將原麗春紅酸性品紅，1%磷鉬酸，2%苯胺藍(lán)的染色時(shí)間分別由15min，5min,5min,縮短為加熱3min,1min,1min.通過(guò)對(duì)以上各步的調(diào)整和改
4、進(jìn)，使染色時(shí)間由原來(lái)的近3h，縮短為30min左右，且顏色對(duì)比度好，層次清楚，胞核胞漿著色均勻。值得注意的是：在經(jīng)過(guò)1%磷鉬酸分化后的幾步禁止用水沖洗，直接用95%酒精洗，然后脫水，透明封片，這樣可防止切片脫色，染出的組織切片效果更好。???[參?考?文?獻(xiàn)] [1]????凌啟波.實(shí)用病理特殊染色和組織化學(xué)[M].廣東高等教育出版社.1989,7.???? [2]????龔志錦,詹洲.病理組織制片和染色技術(shù)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版,1994,10. ?。ㄠy陽(yáng)醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室;鄖陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬太和醫(yī)院病理科,湖北十堰?442000）網(wǎng)狀纖維網(wǎng)狀
5、纖維是一種纖細(xì)的纖維。它沿著網(wǎng)狀細(xì)胞和突起分支，并互相交織成網(wǎng)，因而被稱為網(wǎng)狀纖維，又因這種纖維對(duì)銀的浸染著色特別顯著。故又稱為嗜銀纖維。它主要由III型膠原蛋白構(gòu)成，也具有642nm周期性橫紋[1]。它主要分布于骨髓、脾、淋巴結(jié)、肝和肺等臟器。癌組織中間未見(jiàn)有網(wǎng)狀纖維，但在其邊緣可見(jiàn)有大量的網(wǎng)狀纖維，但在其邊緣可見(jiàn)有大量的網(wǎng)狀纖維圍繞，俗稱癌巢。一、網(wǎng)狀纖維的形成它的形成主要是在纖維母細(xì)胞的粗面內(nèi)漿網(wǎng)中，合成可溶性膠原。在醛糖、類脂的作用下，形成可溶性膠原，隨后它被分泌到細(xì)胞外，在基質(zhì)中（或在細(xì)胞的表面）通過(guò)原膠原蛋白分子間的交聯(lián)，聚合成為不溶性的膠原
6、原纖維即網(wǎng)狀纖維。二、網(wǎng)狀纖維在組織化學(xué)上的反應(yīng)網(wǎng)狀纖維的主要成分是網(wǎng)硬蛋白，在組織化學(xué)上，網(wǎng)狀纖維和膠原纖維是容易區(qū)別的。網(wǎng)狀纖維是分支纖細(xì)的纖維。VanGieson氏染色不顯色或微紅色。PAS反應(yīng)呈現(xiàn)紅紫色，銀浸染為黑色。膠原纖維用VanGieson氏染色為紅色，PAS反應(yīng)呈微粉紅色。銀浸染為黃*色或棕黃*色。三、網(wǎng)狀纖維的顯示1．染色染料技術(shù)：從網(wǎng)狀纖維的顯示，區(qū)別和效果等方面，這種技術(shù)被認(rèn)為是不可靠的，其原因是它只能跟膠原纖維區(qū)別開(kāi)來(lái)。2．金屬浸染技術(shù)：這種技術(shù)對(duì)于顯示網(wǎng)狀纖維被認(rèn)為是十分可靠和廣泛使用的方法，它不但能夠區(qū)別網(wǎng)狀纖維和膠原纖維，而
7、且可顯示纖細(xì)的網(wǎng)狀纖維。嗜銀反應(yīng)（Argyrophilreaction）嗜銀細(xì)胞與親銀細(xì)胞所不同的是需要一種附加的還原劑來(lái)還原，它們比親銀細(xì)胞數(shù)量多。必須注意：親銀反應(yīng)中將找不到任何的嗜銀細(xì)胞。親銀反應(yīng)（Argentaffinreation）親銀細(xì)胞有能力，直接地，不靠外加試劑，將銀液中的銀還原為一種不溶性的黑色金屬銀沉淀的細(xì)胞稱為親銀細(xì)胞。（Cellsthathavetheabilitytodirectlyreducesilversolutionproducinganinsolubleblackmetallicsilverprecipitatearet
8、ermed-angentaffincells）。四、網(wǎng)狀纖維的顯示方法有Gomo
