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1、心肌細(xì)胞培養(yǎng)方法需藥品和器材1、動(dòng)物：SD大鼠乳鼠（2-3天）十只，用于一個(gè)24培養(yǎng)板培養(yǎng)。2、所需液體：2.11640培養(yǎng)基：雙蒸水1000ml,溶解一包1640（10.4g）,M2g碳酸氫鈉，加入青霉素和鏈霉索各100U/ml,即加入下列雙抗各0.5ml。然后用一個(gè)當(dāng)量的鹽酸和NaOH調(diào)PH到7.2左右。最后定容至1000ml,搖勻。通常用蔡式濾器（高壓滅菌）在超凈工作臺(tái)內(nèi)過濾除菌后，分裝，每100ml瓶裝90mlo4°C保存。用時(shí)直接加入10ml小牛血清。2.2胰酶消化液：J］夷蛋口酶的作用是使細(xì)胞間的蛋門質(zhì)水解從而使細(xì)胞
2、離散。用雙蒸水配制濃度0.06%,瞞J1000ml，調(diào)PH值到7.3,過濾除菌后,分裝每100ml一瓶，-20°C凍存。2.3雙抗液：在超凈臺(tái)內(nèi)完成。（青霉素和鏈霉素lmg=1667U,10萬U=60mg）。青霉素是80萬單位/瓶，用注射器加4ml高壓滅菌雙蒸水。鏈霉素是100萬單位/瓶，加5ml高壓滅菌雙蒸水，即每毫升各為20萬單位，-20°C凍存。用時(shí)分裝。2.4小牛血清：新買來的血清要在56°C水浴中滅活30分鐘后，再經(jīng)過抽濾方可加入培養(yǎng)基中使用。2.5碳酸氫鈉液：2.6鹽酸液：2.775%酒精：用于小鼠體表消毒。另外準(zhǔn)備
3、酒精棉球用于消毒。3.50ml小燒杯3個(gè)，用于剪碎心肌細(xì)胞和收集心肌細(xì)胞液。250ml燒杯3個(gè)，由于小三角瓶的水浴。500ml燒杯1個(gè)，用作廢液缸。50ml三角燒瓶，內(nèi)有磁力攪拌子（小轉(zhuǎn)子，酒精擦，雙蒸水沖后，再把酒精徹底沖掉后用三角燒杯高壓）,用于消化心肌細(xì)胞。4.24孔培養(yǎng)板一個(gè)。注射器5ml6個(gè)（J］夷酶、DMEM、胎牛血清），lml2個(gè)（雙抗液），20ml備用2個(gè)，1000ml微量加樣器和槍頭。16套離心管及帽，2個(gè)試管，8套吸管和膠頭。5.溫度計(jì)一只。PH試紙。酒精燈、打火機(jī)/火柴。磁力攪拌器。試管架一個(gè)。心肌細(xì)胞培養(yǎng)
4、方法需藥品和器材1、動(dòng)物：SD大鼠乳鼠（2-3天）十只，用于一個(gè)24培養(yǎng)板培養(yǎng)。2、所需液體：2.11640培養(yǎng)基：雙蒸水1000ml,溶解一包1640（10.4g）,M2g碳酸氫鈉，加入青霉素和鏈霉索各100U/ml,即加入下列雙抗各0.5ml。然后用一個(gè)當(dāng)量的鹽酸和NaOH調(diào)PH到7.2左右。最后定容至1000ml,搖勻。通常用蔡式濾器（高壓滅菌）在超凈工作臺(tái)內(nèi)過濾除菌后，分裝，每100ml瓶裝90mlo4°C保存。用時(shí)直接加入10ml小牛血清。2.2胰酶消化液：J］夷蛋口酶的作用是使細(xì)胞間的蛋門質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。用雙蒸
5、水配制濃度0.06%,瞞J1000ml，調(diào)PH值到7.3,過濾除菌后,分裝每100ml一瓶，-20°C凍存。2.3雙抗液：在超凈臺(tái)內(nèi)完成。（青霉素和鏈霉素lmg=1667U,10萬U=60mg）。青霉素是80萬單位/瓶，用注射器加4ml高壓滅菌雙蒸水。鏈霉素是100萬單位/瓶，加5ml高壓滅菌雙蒸水，即每毫升各為20萬單位，-20°C凍存。用時(shí)分裝。2.4小牛血清：新買來的血清要在56°C水浴中滅活30分鐘后，再經(jīng)過抽濾方可加入培養(yǎng)基中使用。2.5碳酸氫鈉液：2.6鹽酸液：2.775%酒精：用于小鼠體表消毒。另外準(zhǔn)備酒精棉球用于
6、消毒。3.50ml小燒杯3個(gè)，用于剪碎心肌細(xì)胞和收集心肌細(xì)胞液。250ml燒杯3個(gè)，由于小三角瓶的水浴。500ml燒杯1個(gè)，用作廢液缸。50ml三角燒瓶，內(nèi)有磁力攪拌子（小轉(zhuǎn)子，酒精擦，雙蒸水沖后，再把酒精徹底沖掉后用三角燒杯高壓）,用于消化心肌細(xì)胞。4.24孔培養(yǎng)板一個(gè)。注射器5ml6個(gè)（J］夷酶、DMEM、胎牛血清），lml2個(gè)（雙抗液），20ml備用2個(gè)，1000ml微量加樣器和槍頭。16套離心管及帽，2個(gè)試管，8套吸管和膠頭。5.溫度計(jì)一只。PH試紙。酒精燈、打火機(jī)/火柴。磁力攪拌器。試管架一個(gè)。10載玻片（用于培養(yǎng)前看
7、接種密度及消化后看細(xì)胞密度）。2.大銀子2把（一把夾棉球，一把取鼠）。泡沫板1塊，針頭5只，固定四只和頭部。小剪刀4把，小銀子4把（一套剪皮膚、一套開胸取心，一套剔除心緣纖維組織，一套剪碎心臟）。二、準(zhǔn)備工作：1.提前三小時(shí)把胎牛血清、J］夷酶、抗生素拿出來化開。其余未凍藥品也提前20分鐘拿出來緩和一下。2.用紫外線照30分鐘用酒精棉球擦拭臺(tái)面后把下列物品擺放好，然后開鼓風(fēng)機(jī)吹至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。3.臺(tái)面：磁力攪拌器、試管架、泡沫塑料板、五個(gè)針頭、75%酒精及其棉球、大鍛子兩把、3個(gè)250ml燒瓶、1個(gè)500ml燒瓶（廢液缸）、溫度計(jì)、
8、PII試紙（事先調(diào)PH值）、酒精燈、打火機(jī)/火柴、載玻片、6個(gè)5ml注射器、1ml2個(gè)、2個(gè)20ml注射器、1000ml微量加樣器。三、實(shí)驗(yàn)過程1.定和體表消毒：把兩個(gè)5ml注射器分別插入1640和胰酶瓶屮，分別向兩個(gè)小平皿中加入5ml的1640培養(yǎng)液。用一把大
