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《土壤中分解尿素的細(xì)菌分離和計(jì)數(shù).ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用細(xì)菌脲酶分離產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌尿素[CO(NH2)2]——重要的農(nóng)業(yè)氮肥。只能被土壤中細(xì)菌分解為NH3才能被植物吸收利用CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3課題背景課題目的土壤中尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌統(tǒng)計(jì)每克土樣中究竟含有多少這樣的細(xì)菌思考：PCR技術(shù)要求使用耐高溫的DNA聚合酶，這種酶要能忍受93℃左右的高溫。如果請你來尋找這種耐高溫的酶，你會(huì)去哪里尋找？()A．土壤中B．海水中C．熱泉中D．冷庫中C如何尋找耐高溫的酶？—尋找高溫環(huán)境；原理：熱泉70-80℃的高溫條件淘汰了絕大多數(shù)的微生
2、物，使得耐熱的Taq細(xì)菌脫穎而出。選出耐高溫細(xì)菌后，從耐高溫菌種中提取耐高溫酶。1、自然界中目的菌株的刷選原理：一、篩選菌株2、實(shí)驗(yàn)室中篩選微生物的原理：（純且活的菌種）在尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去找。人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？此配方能否篩選出分解尿素的細(xì)菌？為什么？?
3、碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌能利用尿素作為氮源而生存。3、方法：利用選擇培養(yǎng)基分離選擇培養(yǎng)基：允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。(1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。利用選擇培養(yǎng)基分離微生物的方法：例如，加入青霉素可以分離出；加入高濃度的食鹽可以得到。酵母菌和霉菌金黃色葡萄球菌這里的加入是在培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入。(2)改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。例如，缺乏氮源時(shí)可以分離；尿素作為唯一氮源時(shí)，可以分離出石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出固氮微生物能消除石油污染的微生物能分解尿素的細(xì)菌(3)改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)
4、境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物本課題使用的培養(yǎng)基的配方如下：請分析后回答：(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是________和________。(2)該培養(yǎng)基為____________培養(yǎng)基(按物理狀態(tài)分)，理由是______________。(3)想一想這種培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？____________________________________________________________________________。葡萄糖尿素固體有凝固劑瓊脂有選擇作用。此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能夠利
5、用尿素的微生物才能夠生長二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目1、方法：常用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌的數(shù)目原理：?當(dāng)樣品的時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在統(tǒng)計(jì)?通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少的活菌。要求：30～300個(gè)菌落的平板稀釋度足夠高一個(gè)活菌例：兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。1、甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230。2、乙同學(xué)在該濃度下涂布了A、B、C三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的
6、平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。你認(rèn)為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如果有問題，錯(cuò)在哪？甲：沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布3個(gè)平板）乙：A組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計(jì)算平均值?用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是()A．涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250，取平均值233因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因
7、此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)表示。=（平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積）×稀釋倍數(shù)。缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的誤差。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低每克樣品中的菌株數(shù)=（C/V)XMC:某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V:所用稀釋液的體積；M:稀釋倍數(shù)。計(jì)算公式：顯微鏡直接計(jì)數(shù)優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：計(jì)數(shù)方便，操作簡單死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果比實(shí)際值偏大（統(tǒng)計(jì)菌株數(shù)目）1、產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是（）A一個(gè)細(xì)菌、液體培養(yǎng)基B許多細(xì)菌、液體培養(yǎng)基C一個(gè)細(xì)菌、固體培養(yǎng)基D許多細(xì)菌、固體培養(yǎng)
