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1、影響試管苗生根的因素試管苗生根是組織培養(yǎng)快速繁殖的重要環(huán)節(jié)。只有當(dāng)組培苗有了很好的根系時(shí)才能保證移栽成活。試管苗的生根受很多因素的影響,在實(shí)際生根時(shí)可以通過調(diào)節(jié)很多因素來使其容易生根。影響試管苗生根的因素主要有:(1)植物材料各種植物種植成活的難易程度不同。同樣的,不同的植物、不同的品種、同一植物的不同部位和不同年齡對(duì)生根都有決定性的影響。生根難易還與母株所處的生理狀態(tài)有關(guān),因?yàn)槿〔募竟?jié)和所處環(huán)境條件均有影響。一般的,試管苗生根和扦插苗生根是一樣的,即扦插生根容易的植物,試管苗生根也容易;扦插生根困難的植物,
2、試管苗生根也困難。比如,月季等扦插生根比較容易,試管苗也比較容易。月季扦插不同植物生根的規(guī)律是:成年的比幼年的生根難,木本植物比草本植物生根難。試管苗一般都比較幼嫩,但是有些試管苗在培養(yǎng)瓶中生長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng),莖木化程度比較高,這類苗不容易生根。生長(zhǎng)旺盛幼嫩的試管苗容易誘導(dǎo)生根。(2)基本培養(yǎng)基試管苗生根是一個(gè)從異養(yǎng)狀態(tài)進(jìn)入自養(yǎng)狀態(tài)的一個(gè)變化。利用根系來吸收營(yíng)養(yǎng)和水分是植物體的一種本能。在培養(yǎng)基中有高濃度的營(yíng)養(yǎng)元素,特別是糖能滿足的情況下,試管苗產(chǎn)生依賴性而不易生根,所以減少培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和糖的含量即可刺激生根。
3、試管苗生根大多數(shù)使用低濃度的MS培養(yǎng)基,其中經(jīng)常使用1/2MS和1/3MS培養(yǎng)基。不同植物對(duì)培養(yǎng)基的要求也不同。在無籽西瓜生根中,降低無機(jī)鹽濃度,有利于生根,而且根多而粗壯,發(fā)根也快,加鐵鹽則更好。糖的濃度一般用2%,有些植物在無糖培養(yǎng)基上也能生根。培養(yǎng)基中的其他成分也和生根有關(guān),有機(jī)成分中的維生素B1,維生素B6,維生素B12都有利于生根。培養(yǎng)基的pH值對(duì)試管苗的生根也有一定的影響。因此需要求一定的pH值范圍,一般在5.0—6.0。據(jù)報(bào)道,pH值顯著影響小蘿卜幼苗切后側(cè)根的形成,pH為3.8時(shí),側(cè)根原基為為
4、每平方厘米60條,pH為5.8時(shí)則降為每平方厘米18條。水稻離體種子根生長(zhǎng),隨pH值由3.3升高至5.8而加快。(3)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)生長(zhǎng)素有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用,它一方面使細(xì)胞壁疏松,增加可塑性,促進(jìn)了細(xì)胞的縱向伸長(zhǎng);另一方面生長(zhǎng)素又促進(jìn)了蛋白質(zhì)等物質(zhì)的合成,從而增加了原生質(zhì)體的量。生長(zhǎng)素中主要有吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)和吲哚丁酸(IBA)。這三種生長(zhǎng)素一般都能有效促進(jìn)生根。但不同種類的植物對(duì)生長(zhǎng)素的種類和濃度的要求也不同。使用不同種類的生長(zhǎng)素,不但影響生根的數(shù)量,而且影響生根的質(zhì)量。一般用IAA誘導(dǎo)
5、生成的根比較細(xì)長(zhǎng),NAA誘導(dǎo)生成的根比較短粗,而IBA誘導(dǎo)的根則介于二者之間。生根與生長(zhǎng)素的濃度有關(guān),生長(zhǎng)素濃度越高,根越向短粗方向發(fā)展,進(jìn)一步增加生長(zhǎng)素的濃度,超過一定極限,則引起愈傷組織化,影響根的形成和生長(zhǎng)。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的使用方法有2種:一種是將適宜濃度的生長(zhǎng)素預(yù)先加入到培養(yǎng)基中,然后將無根的試管苗接種上使其誘導(dǎo)生根;另一種是在無菌條件下將五根苗的莖段剪下來,用一定濃度的無菌生根溶液浸泡1~2小時(shí)后,再接種到不含激素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)生根。(4)培養(yǎng)條件溫度試管苗在試管內(nèi)生根,或在試管外生根,都要求一定
6、的適宜溫度,一般在16℃—25℃,過高過低均不利于生根。不同植物最適生根溫度不同。據(jù)報(bào)道,草莓繼代培養(yǎng)芽的再生是32℃,生根是28℃最好,16℃時(shí)根長(zhǎng)增加5mm—8mm,根數(shù)為5條,而28℃時(shí)根長(zhǎng)可增加11mm,產(chǎn)生19條根。溫度對(duì)馬鈴薯塊莖離體培養(yǎng)物發(fā)根也有影響,發(fā)根最適溫度高于分枝的最適溫度。光照光照強(qiáng)度和光照時(shí)間對(duì)發(fā)根的影響十分復(fù)雜,結(jié)果不一。一般認(rèn)為生根不需要光照。例如,試管苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基后,先進(jìn)行一周左右的暗培養(yǎng),再轉(zhuǎn)入正常關(guān)照培養(yǎng),有利于根的形成。但是暗培養(yǎng)影響上部植物的生長(zhǎng),不利于培養(yǎng)壯苗。若
7、在生根培養(yǎng)基中加入0.1%-0.3%的活性炭,不僅使生根處于較暗的條件下,而且還能吸附一些有毒物質(zhì),使根不易褐變,有利于根的形成和生長(zhǎng)。影響安祖花生根的因素有一下幾方面:(1)轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基的芽苗的高度一般實(shí)驗(yàn)中都是將長(zhǎng)度大于1.0cm的生長(zhǎng)健壯的芽苗切成單苗接種于生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。而在叢狀芽繼代培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)在同一種培養(yǎng)基上,無菌苗高的易生根,當(dāng)高度在3.0cm以上時(shí),生根率最高達(dá)85.4%;在2.0cm以下時(shí),誘導(dǎo)生根率較少,僅53.5%。(2)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑三種生長(zhǎng)素(IAA、NAA、IBA)對(duì)安祖花的
8、生根均有促進(jìn)作用,其生根作用的效應(yīng)依次為IAA、IBA、NAA。IAA在0.2~1.0mg/L的范圍內(nèi)生根效果最好;IBA在0.2~1.0mg/L的范圍內(nèi)效果最好;NAA在0.1~0.4mg/L的范圍內(nèi)效果最好。不定芽真根發(fā)生率隨著IAA濃度增大而增大。IAA,IBA,NAA利于生根的適宜濃度分別為1.0mg/L、1.0mg/L、0.4mg/L,生根率分別為91%,70%,63%。IAA為1.0mg