移液器操作技巧.doc

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1、移液器操作技巧前言：移液結(jié)果會很容易受到使用技法的影響。為了獲得最佳結(jié)果，需要采用良好的移液技法。技巧1：一致性在按壓與釋放定位銷時(shí)，需要保持一致的節(jié)奏、速度和技法。吸液速度過快會導(dǎo)致套柄與活塞噴濺、產(chǎn)生氣霧以及受到污染，甚至導(dǎo)致樣品量損耗。一致性可使準(zhǔn)確度提高達(dá)5%。技巧2：正確填充吸頭當(dāng)某一吸頭的建議（標(biāo)稱）范圍為最大吸頭容量（標(biāo)稱容量）的10%至100%時(shí)，可在35%至100%這一較小以及優(yōu)化的范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)最高精確度。在如此小的范圍內(nèi)移液會減少對操作人員技法的要求，并可將結(jié)果準(zhǔn)確度提高約1%。當(dāng)達(dá)到標(biāo)稱容量的50%時(shí)可提供最佳結(jié)果。技巧3：吸液時(shí)保持垂直入水角使入水角盡可能地接

2、近垂直位置–否則垂直液柱較小，這樣將會吸入過多樣品。（分液時(shí)，吸頭應(yīng)當(dāng)與容器壁保持較小角度，從而確保良好的排液效果。關(guān)于分液的更多技巧將在下一期電子快訊中提供）使用垂直位置（尤其是使用微量移液器時(shí)），可使準(zhǔn)確度提高達(dá)2%。技巧4：一致性千分尺設(shè)置始終從同一方向設(shè)置您的千分尺。最好從高至低進(jìn)行：在將容量設(shè)置從高容量減少降至低容量時(shí)，只需將表盤下調(diào)至所需容量設(shè)置。提高容量設(shè)置時(shí)，轉(zhuǎn)動(dòng)選擇輪使其略微超過所需容量，然后緩慢回調(diào)至正確設(shè)置。這可避免機(jī)械回沖。正確設(shè)置容量可使準(zhǔn)確度提高達(dá)0.5%。技巧5：吸頭入水深度正確的吸頭入水深度對于微量移液器尤為重要。如果吸頭入水過深，則隨著壓力的加大，

3、吸液量將會增多。保留在吸頭表面的液體會影響結(jié)果。如果吸頭未入水過深，則會造成空氣進(jìn)入，從而產(chǎn)生氣泡以及導(dǎo)致容量不準(zhǔn)確。正確的入水深度可使準(zhǔn)確度提高達(dá)5%。?移液器容量?入水深度?2?與10ul?1mm?20與100ul?2-3mm?200與1000ul?3-6mm?5000ul與10ML?6-10mm技巧6：分液技法對于大多數(shù)應(yīng)用而言，建議在分液時(shí)將吸頭的末端貼靠容器壁。這可減少或者消除分液后殘留在吸頭上的樣品。沿側(cè)壁向上滑動(dòng)吸頭末端將移液器拆下，從而去除吸頭孔處的任何殘留液滴。此技法可使結(jié)果準(zhǔn)確度提高達(dá)1%。另一種技法是直接分液到液體表面。使用諸如RAININFinePoint吸

4、頭之類的薄壁吸頭十分重要，這是因?yàn)檫@些吸頭允許充分排液。如果直接分液至液體中，則建議進(jìn)行反向模式移液，從而防止分液后吸液。技巧7：預(yù)清洗移液前至少預(yù)清洗兩遍，從而補(bǔ)償位于吸頭內(nèi)部的液體。這還有助于中和毛細(xì)管效果以及使移液器內(nèi)部的空氣溫度等于樣品溫度。使用正在分液的相同液體進(jìn)行預(yù)清洗。使用吸頭吸液，然后將其重新分液至儲罐或者廢液箱預(yù)清洗可為所有等分溶液提供相同的接觸表面當(dāng)與水液一同使用時(shí)，兩次預(yù)先沖洗可使準(zhǔn)確度提高達(dá)0.2%技巧8：預(yù)清洗異常處理盡管預(yù)清洗在大多數(shù)情況下可提高準(zhǔn)確性，但是當(dāng)對非常溫和或者冰冷的溶液進(jìn)行移液時(shí)，它會對結(jié)果產(chǎn)生不利影響。不建議進(jìn)行預(yù)清洗的例外情況為：-對非

5、常冰冷的溶液（如：冰浴）進(jìn)行移液-對37°C或以上的溫和溶液進(jìn)行移液對溫和或者冰冷溶液進(jìn)行預(yù)清洗有可能造成高達(dá)5%的錯(cuò)誤率。技巧9：恒定室溫在恒定室溫條件下移液。移液的理想室溫為+-21.5°C，此溫度同樣適用于校準(zhǔn)。防止溫度大幅度或者突然變化，這是因?yàn)橐埔浩髦械目諝鉄o法足夠快速地適應(yīng)，以及樣品量可能會受到影響。在恒溫條件下移液可使準(zhǔn)確度提高達(dá)5%。技巧10：始終垂直存放移液器不要將移液器平放在抽屜內(nèi)或者工作臺上。這有可能損壞套柄末端，從而造成泄漏。此外，殘留液體還會流入套柄中，從而污染移液器。正確儲存移液器可防止不可估量的錯(cuò)誤以及保護(hù)儀器。技巧11：吸頭入水時(shí)間在將樣品吸入吸頭時(shí)

6、，在樣品中的入水時(shí)間是良好移液技法中的關(guān)鍵因素。在平穩(wěn)松開定位銷按鈕之后，必須進(jìn)行短暫暫停，然后再從樣品中取出，以確保將全量樣品吸入吸頭中。如果量較大以及對于粘性物質(zhì)而言，必須在等候較長時(shí)間后再取出，因?yàn)橐埔浩髦械臍馐倚枰幻腌姷臅r(shí)間才能實(shí)現(xiàn)均衡。技巧12：吸液速率移液器的吸液速率不盡相同，因此會對結(jié)果的精度與準(zhǔn)確度產(chǎn)生影響。用戶應(yīng)使用以一種平穩(wěn)并且受控的方式釋放移液器定位銷按鈕。釋放過快的定位銷可能出現(xiàn)的最常見后果是：氣霧會進(jìn)入移液器套柄中，從而損壞移液器的內(nèi)部部件。當(dāng)出現(xiàn)向上噴濺液體的情況時(shí)，這種現(xiàn)象更為明顯。如果液體具有腐蝕性，則有可能損壞移液器的套柄并且會造成樣品交叉污染。

7、技巧13：反向移液模式對于科研人員而言，使用移液器對粘性與密致液體進(jìn)行精準(zhǔn)吸液與分液一直是一道難題。對策是使用反向移液模式。進(jìn)行樣品吸液時(shí)，將定位銷下按至“排液”。將所選液量和多余液體吸入吸液器吸頭中。然后在分液時(shí)，將定位銷只按至零位。通過此方法，在分液時(shí)液體會保持在吸頭內(nèi)。對于生物、粘性或起泡液體而言，反向移液可改進(jìn)結(jié)果。