石蠟切片方法.doc

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1、fú參照郭郛等方法(郭郛1988)①Duboseq-BrasiL固定液：苦味酸飽和溶液1份甲醛60份冰醋酸15份80%酒精150份⑤海登漢（Heidenhein）鐵礬蘇木精染色劑蘇木精1g100%酒精50ml冰醋酸5ml甘油50ml硫酸鋁鉀（鉀礬）5g蒸餾水50ml碘酸鈉0.2g配制步驟：a.將蘇木精溶解在15ml無(wú)水乙醇中，加冰醋酸攪拌溶解。b.加甘油，攪拌。c.加35ml無(wú)水乙醇。d.將鉀礬在研缽中研碎，加熱溶解在蒸餾水中。e.將溫?zé)岬拟浀\溶液緩慢加入到蘇木精溶液中，并隨加隨攪拌。f.加碘酸鈉促使溶液成熟。⑦2.5

2、%鐵礬咬色、褪色液:硫酸鐵銨（鐵礬）2.5g蒸餾水100ml⑧洗液：95%酒精20份鹽酸1份第一天①固定：將解剖好的消化系統(tǒng)浸入Duboseq-BrasiL固定液24小時(shí)以上，作為實(shí)驗(yàn)材料。第二天（早晨）②脫水經(jīng)30%酒精→40%酒精→50%酒精→60%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精，逐級(jí)脫水。經(jīng)80%酒精之前的各步可處理5分鐘以上，之后各步處理應(yīng)在5分鐘以內(nèi)。（70min左右）③透蠟（需要提前準(zhǔn)備）將54-56℃的石蠟放在60℃恒溫箱中融化。（需要提前準(zhǔn)備）用二甲苯作為透蠟劑，將脫

3、水后的腸道先經(jīng)1/2純酒精+1/2二甲苯→二甲苯各處理5分鐘，再將腸道放到二甲苯和石蠟的混和液（1:1）中浸12小時(shí)，最后用純石蠟浸24小時(shí)以上（以上兩步均在溫箱中進(jìn)行），確保石蠟浸入腸道各組織中。脫水和透蠟均在小燒杯或酒盅內(nèi)操作。第四天④包埋用硬紙先折成小紙盒，放到水平桌面上，將盛有石蠟及材料的小酒盅從溫箱中取出，置于酒精燈加熱的水浴中（保持石蠟呈溶解狀態(tài)即可，溫度不可太高），把液體石蠟倒入小紙盒中，待稍微冷卻，用吸管迅速將腸道從酒盅吸到紙盒的石蠟中，用解剖針調(diào)整好位置，然后小心將紙盒放在冷水中，使石蠟漸漸凝固，取出

4、剝?nèi)ゼ埡胁⒕幪?hào)。第五天⑤切片與貼片將蠟塊修成大小適宜的蠟條，牢牢地粘在臺(tái)木上，用手動(dòng)切片機(jī)連續(xù)切片，厚度為5～6μm。貼片劑為蛋清加少許甘油，充分?jǐn)噭?，蛋清要先過(guò)濾。在干凈的載玻片上加極微量的貼片劑，用拇指涂勻，將切的蠟片放上，用滴管吸水沿蠟片一角向底面加水，然后在水浴鍋上輕微烤片，使蠟片慢慢均勻展平，最后去除多余的水分。（提前一天準(zhǔn)備）載玻片和蓋玻片（即使是新的）用前必須先在洗液中浸一夜，洗去油污，然后用蒸餾水沖洗，再放到95%酒精中浸洗，最后用白細(xì)布擦凈備用。⑥干燥將貼好的切片室溫下干燥一夜。第十五天（早晨）⑦脫蠟

5、與染色在染色缸中進(jìn)行。將切片放到兩缸二甲苯中脫蠟兩次，每次20分鐘左右，然后進(jìn)入以下步驟：1/2二甲苯+1/2純酒精→純酒精→95%酒精→90%酒精→80%酒精→70%酒精→50%酒精→蒸餾水處理，以上各步各5-10分鐘，然后放到2.5%鐵礬液中咬色15分鐘，經(jīng)蒸餾水漂洗后，再放到鉀礬蘇木精染色劑中染色15分鐘，取出后用水漂洗，再將切片放到2.5%鐵礬液中褪色、分色，隨時(shí)鏡檢，直到染色效果滿意為止。在以后的脫水步驟中，當(dāng)脫水至90%酒精后，將切片放到95%酒精伊紅染色劑中作雙重染色，隨時(shí)鏡檢。⑧脫水、透明與封片將染好色

6、的切片經(jīng)30%酒精→50%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精伊紅→95%酒精→純酒精，逐級(jí)脫水各5分鐘，然后經(jīng)1/2純酒精+1/2二甲苯→二甲苯透明3分鐘。以上各步均在染色缸中進(jìn)行。最后用中性樹(shù)膠封片，干燥后貼加標(biāo)簽裝盒，以待研究觀察。