免疫層析試驗(yàn).doc

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1、免疫層析試驗(yàn)以雙抗體夾心法測(cè)尿hCG為例來介紹免疫層析試驗(yàn)的方法。[目的](1)掌握免疫層析試驗(yàn)的原理。(2)熟悉雙抗體夾心法測(cè)尿hCG的方法、結(jié)果判定及應(yīng)用。[原理]抗hCG免疫金復(fù)合物干片粘貼在試劑條近下端G區(qū)(圖1-17)，抗hCG單克隆抗體和小鼠IgG抗體分別固化于NC膜的測(cè)試區(qū)(T區(qū))和質(zhì)控參照區(qū)(C區(qū))。當(dāng)試紙條下端(A區(qū))浸入液體標(biāo)本中，吸水材料即吸取液體，通過層析作用，液體向B端移動(dòng)，流經(jīng)干片時(shí)，使抗hCG免疫金復(fù)合物復(fù)溶，并帶動(dòng)其向膜條滲移。若標(biāo)本中有hCG，可與抗hCG免疫金復(fù)合物結(jié)合。此抗原體

2、復(fù)合物流至T區(qū)時(shí)即被固相抗hCG單克隆抗體所獲，形成金標(biāo)抗體一抗原一抗體復(fù)合物，在T區(qū)顯現(xiàn)出紅色反應(yīng)線條。過剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行，至C區(qū)被固相抗小鼠IgG捕獲，呈現(xiàn)出紅色質(zhì)控線條。[材料](1)“一步金”法早早孕妊娠診斷試紙條(有商品供應(yīng))。(2)孕婦尿液，待測(cè)尿液。(3)尿液收集杯等。[方法](1)將試劑條及待測(cè)標(biāo)本置室溫一定時(shí)間以充分復(fù)溫。(2)從原包裝鋁箔袋中取出試劑條，將試劑條按箭頭方向插人尿液標(biāo)本中。注意:尿液液面不能超過試劑條的標(biāo)記線。(3)約5S后取出放于干凈平整的臺(tái)面上觀察，3min時(shí)讀取結(jié)果，

3、10min后判定無效。在戲遲出死~條心線待技床樣無h(G(陰臨)[結(jié)果判斷]1.陰性試劑條上僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)條紫紅色線，在測(cè)試區(qū)內(nèi)無紫紅色線出現(xiàn)(圖1-18a)。2.陽性試劑條上出現(xiàn)兩條紫紅色線，一條位于測(cè)試區(qū)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)內(nèi)(圖1-18b)。3.弱陽性試劑條測(cè)試區(qū)的線條顏色明顯淺于質(zhì)控區(qū)內(nèi)的紫紅色線，表明可疑，2d后應(yīng)重新測(cè)試，以免漏診(圖1-18c)。4.無效試劑條上無任何線條出現(xiàn)，或僅出現(xiàn)測(cè)試區(qū)線條而質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)，表明操作過程不正確或試劑條已變質(zhì)失效。