4種國產(chǎn)金免疫層析試驗試劑檢測hbsag應(yīng)用評價

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1、4種國產(chǎn)金免疫層析試驗試劑檢測HBsAg應(yīng)用評價陳華根宋強劉小花(成都市新都區(qū)人民醫(yī)院成都新都610500)【摘要】對4種國產(chǎn)金免疫層析試驗(GICA)試劑進行干擾和靈敏度試驗，評價試劑臨床應(yīng)用價值?！娟P(guān)鍵詞】金免疫層析試驗；乙肝病毒表面抗原；檢測；評價【中圖分類號】R446【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】2095-1752(2015)23-0333-02我國是乙肝病毒感染大國，HBsAg—般人群攜帶率9.09%⑴。作為判斷乙肝病毒感染和診斷乙型肝炎的病毒標(biāo)志物，HBsAg是感染性疾病標(biāo)志物檢測中應(yīng)用最為廣泛的項目。傳統(tǒng)的凝集試驗己逐漸弄去，基木采用各種免疫標(biāo)記技術(shù)檢測。G

2、ICA自20世紀80年代運用于臨床以來，已大量用于HBsAg檢測。我們選用具有國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)文號的4個廠家的GICA試劑，進行干擾和靈敏度試驗，評價其臨床應(yīng)用價值。1?材料和方法1.1試劑和儀器GICA試劑，北京藍十字生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；北京萬泰生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；廣州萬孚生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；廈門英科新創(chuàng)公司產(chǎn)品。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑采用廈門英科新創(chuàng)公司產(chǎn)品。洗板機系熱電Wellwashplus,酶標(biāo)儀系芬蘭WellscanMK3。1.2樣本定值血清，分別為lng/ml>2ng/ml>5ng/ml和>10000ng/ml,購于北京康徹斯

3、坦公司,ELISA法基線測定lng/ml>2ng/ml和5ng/ml的S/CO均值分別為3.4、7.3和13.1；溶血樣本,抽全血3ml,自然收縮后3000轉(zhuǎn)/min,離心15分鐘，取血清利用ELISA法平行檢測HBsAg,S/CO均值為20.4”然后將盛血試管放入?20°C冰箱冷凍過夜保存,解凍后3000轉(zhuǎn)/min離心15分鐘，是為溶血樣本；黃疸血樣本,TB122?mol/L/ELISA法平行測定HBsA已S/CO均值為18.3；脂血樣本，TG11.5mmol/L,ELISA法平行測定HBsA爲(wèi)S/CO均值為15.8。1.3方法嚴格控制實驗條件，室溫18°C-25°C

4、,濕度40%?60%,光線充足。嚴格按照試劑說明書要求操作，各類樣本平行測定5次。檢測線和質(zhì)控線同吋出現(xiàn)紅色為陽性。2.結(jié)果靈敏度試驗，4種GICA試劑檢測lng/ml>2ng/ml>5ng/ml和>10000ng/ml定值血清，15秒?25秒內(nèi)都能出現(xiàn)質(zhì)控帶。2ng/ml血清20秒?25秒內(nèi)出現(xiàn)檢測帶，至30分都呈極淺紅色，吋序上檢測帶出現(xiàn)在質(zhì)控帶之后；5ng/ml血清15秒?20秒出現(xiàn)檢測帶，時序上與質(zhì)控帶基本同步出現(xiàn)，至30分檢測帶呈淺紅色；>；10000ng/ml血清10秒?15秒岀現(xiàn)檢測帶，時序上早于質(zhì)控帶，至30分檢測帶呈紅色，顏色明顯深于質(zhì)控帶；

5、lng/ml血清至30分都未見檢測帶呈色。干擾試驗，4種GICA試劑檢測溶血樣本、黃疸血樣本和脂血樣本，都能在25秒內(nèi)出現(xiàn)紅色的檢測帶和質(zhì)控帶。3.討論HBsAg是由乙肝病毒S基因編碼含226個氨基酸的乙肝病毒外膜蛋白，常與Dane顆粒并存，因此，把HBsAg作為乙肝病毒感染和診斷乙型肝炎的指標(biāo)⑵。檢測HBsAg的標(biāo)記免疫方法有多種，如放射免疫、酶免疫、金標(biāo)免疫及發(fā)光免疫。臨床運用最廣泛的是酶免疫測定(ELISA),國產(chǎn)批批檢合格ELISA試劑檢測HBsAg,檢測下限可低于0.5ng/ml,接近或達到進口試劑水平［3］。ELISA環(huán)節(jié)影響因素多，從樣本的采集和保存、試劑

6、溫度平衡、加樣、溫育、洗滌、顯色比色到結(jié)果判讀都需要嚴格控制、正規(guī)操作，U需要冰箱、加樣器、溫育箱、洗板機和酶標(biāo)儀等設(shè)備。溶血、脂血、黃疸血等樣本都會對檢測結(jié)果造成影響，也有報道高濃度HBsAg值因hook效應(yīng)致陰性檢出［4?5］。GICA自首次用來檢測HCG以來，也人量用于感染性疾病標(biāo)志物檢測。因其具有簡便快速，室溫存放，無需設(shè)備，影響因素少，安全等特點，尤其適合床旁檢驗。本次用GICA試劑檢測各種樣本HBsAg實驗表明，溶血、脂血及黃疸血等外源性標(biāo)本影響因素對檢測結(jié)果無影響。各種試劑對HBsAg濃度lng/ml(S/CO均<3.4)都無法檢出,對于HBsAg濃度2n

7、g/ml(S/CO均值7.3)檢測帶呈色極弱,因此GICA試劑檢測HBsAg的檢測下限應(yīng)在2ng/ml左右，而與一些試劑盒本身標(biāo)明檢測靈敏度lng/ml有岀入，檢測HBsAg濃度>10000ng/ml樣本，檢測帶呈色早而深”通常血中高濃度HBsAg應(yīng)無hook效應(yīng)影響。臨床實踐中，常有不少低濃度HBsAg陽性者，如應(yīng)用GICA檢測HBsAg,勢必造成漏檢，因此，GICA不宜用于臨床HBsAg檢測。血站系統(tǒng)應(yīng)用GICA檢測義務(wù)獻血者HBsAg有一定實際意義,因系初篩，可以檢測出大部分HBsAg陽性者，從而降低勞動強度，減少耗材消耗，對