實(shí)驗(yàn)一 種子活力測(cè)定.doc

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1、高級(jí)植物生理實(shí)驗(yàn)報(bào)告種子生理農(nóng)學(xué)院農(nóng)藥學(xué)東保柱2013年12月27日種子活力種子活力即種子的健壯度，是種子發(fā)芽和出苗率、幼苗生長(zhǎng)的潛勢(shì)、植株抗逆能力和生產(chǎn)潛力的總和，是種子品質(zhì)的重要指標(biāo)。長(zhǎng)期以來(lái)都用發(fā)芽試驗(yàn)檢驗(yàn)種子的質(zhì)量，生產(chǎn)實(shí)踐表明，實(shí)驗(yàn)室的發(fā)芽率與田間的出苗率之間往往存在很大差距。由于種子活力是一項(xiàng)綜合性指標(biāo)，因此靠單一活力測(cè)定指標(biāo)判定其總活力水平或健壯度是不科學(xué)的。實(shí)驗(yàn)1種子活力的測(cè)定種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽指數(shù)的測(cè)定（垂直板發(fā)芽法）一原理種子在適宜的水分、氧氣、溫度條件下經(jīng)一段時(shí)間可以萌發(fā)。在最適宜條件和規(guī)定天數(shù)內(nèi)，發(fā)芽的種子數(shù)與供試的種子的百分比，叫發(fā)芽率。為了表示萌發(fā)速度與整齊

2、度，反映種子活力程度，規(guī)定在短時(shí)間內(nèi)能正常萌發(fā)的種子數(shù)叫發(fā)芽率（測(cè)定發(fā)芽與發(fā)芽天數(shù)可參看下述的《種子發(fā)芽試驗(yàn)的技術(shù)規(guī)定》）。發(fā)芽數(shù)與發(fā)芽相應(yīng)天數(shù)之比的和叫發(fā)芽指數(shù)。二材料與設(shè)備1材料：小麥種子。2設(shè)備：玻璃板濾紙或濕沙恒溫箱鑷子3藥品：1%次氯酸鈉（NaClO）三實(shí)驗(yàn)步驟1選取完整健壯的種子10-15粒，三個(gè)重復(fù)，用1%次氯酸鈉消毒0.5—1min,將種子均勻地排列在有濾紙的培養(yǎng)皿中，種子之間留有一定距離，加入適量蒸餾水，放于所需溫度條件下萌發(fā)。2每天定時(shí)記錄發(fā)芽粒數(shù)。根據(jù)附表《種子發(fā)芽試驗(yàn)的技術(shù)規(guī)定》計(jì)算種子的發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率和發(fā)芽指數(shù)。3計(jì)算正常發(fā)芽的種子數(shù)1、發(fā)芽率（%）=×100供試種

3、子數(shù)2、發(fā)芽指數(shù)(式中：Gi—發(fā)芽指數(shù)Gt——在時(shí)間t日發(fā)芽日數(shù)Dt——相應(yīng)的發(fā)芽日數(shù)四注意事項(xiàng)1對(duì)于1—2天內(nèi)全部萌發(fā)的迅速發(fā)芽類(lèi)型種子，不適用上述公式計(jì)算，宜采用簡(jiǎn)化活力指數(shù)（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)21）。2種子發(fā)芽試驗(yàn)的技術(shù)規(guī)定（附表）實(shí)驗(yàn)2種子活力指數(shù)的測(cè)定一原理萌發(fā)種子幼根的生長(zhǎng)勢(shì)是反映活力的一個(gè)較好生理指標(biāo)，如將發(fā)芽指數(shù)與幼苗生長(zhǎng)量聯(lián)系起來(lái)（二者的乘機(jī)），以活力指數(shù)（Vl）來(lái)表示，可以作為種子的活力指標(biāo)。但是，對(duì)于一些萌發(fā)迅速的種子，不必要計(jì)算活力指數(shù)，可用發(fā)芽率乘幼苗生長(zhǎng)量的簡(jiǎn)化活力指數(shù)（G·S）表示。對(duì)于具明顯主根的種子如花生大豆等，幼苗生長(zhǎng)量可用胚根長(zhǎng)或胚根重表示。二．材料與設(shè)備1材料：小

4、麥種子。2設(shè)備：玻璃板恒溫箱發(fā)芽缸（或箱）約20cm高尺子或天平濾紙細(xì)繩或橡皮筋3藥品1%次氯酸鈉（NaOCl）三．實(shí)驗(yàn)步驟1選取完整健壯的10-15種子，在水中吸脹2—4小時(shí)后，采取玻璃板直立發(fā)芽法。玻板直立發(fā)芽法：發(fā)芽箱由塑料板制成，規(guī)格為20×15×20cm,玻板規(guī)格20×15cm，濾紙規(guī)格42×15cm,對(duì)折濾紙，平鋪在玻板，掀開(kāi)上層濾紙，用蒸餾水濕潤(rùn)下層濾紙，將種子橫向排列在濾紙中部，胚向下，保持一定粒距。然后將上層濾紙覆蓋在種子上。如種子較大，可用細(xì)繩或橡皮筋縛扎在覆蓋種子處的濾紙外面，防止種子滑落。玻板垂直插入發(fā)芽箱中，玻板間保持一定距離。在發(fā)芽箱中加入約2cm深蒸餾水層，加蓋

5、，留氣孔，放在所需溫度條件下萌發(fā)。2.萌發(fā)3天（72小時(shí)）后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率及測(cè)量胚根長(zhǎng)度和下胚軸長(zhǎng)度（大豆花生棉花），如小麥水稻，則需剪下須根稱(chēng)重，或測(cè)量幼苗長(zhǎng)度。3.計(jì)算式中：vl——活力指數(shù)Gt——在時(shí)間t日的發(fā)芽數(shù)Dt——相應(yīng)的發(fā)芽日數(shù)S——幼苗生長(zhǎng)勢(shì)（平均長(zhǎng)度或干、鮮重）簡(jiǎn)化活力指數(shù)（G·S值）=發(fā)芽率（%）×生長(zhǎng)量（平均長(zhǎng)度或干量，鮮重）四注意事項(xiàng)1玻板直立發(fā)芽時(shí)應(yīng)在密閉的容器中，保持飽和濕度。2對(duì)于根毛不多的種子，可用重量來(lái)表示生長(zhǎng)量。3為了防止發(fā)霉，種子萌發(fā)前應(yīng)進(jìn)行消毒（用1%次氯酸鈉消毒0.5-1min）.實(shí)驗(yàn)3氯化三苯基四氮唑（TTC）法一原理有生命力的種胚在呼吸過(guò)程中產(chǎn)生氧化

6、還原反應(yīng)，而無(wú)生命的種胚則無(wú)此反應(yīng)。當(dāng)TTC滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶Ⅰ或Ⅱ（NADH2或NADPH2）上的氫還原時(shí)，便由無(wú)色的氯化三苯基四氮唑（TTC）變?yōu)榧t色的三苯基甲（TTF）.染色后經(jīng)丙酮提取，用分光光度計(jì)測(cè)出光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出TTC含量（μg/ml）,定量計(jì)算脫氫酶的活性。TTC含量高即脫氫酶活性強(qiáng)，表示種子活力高。二材料與設(shè)備1材料小麥種子2設(shè)備試管燒杯容量瓶（10ml）微量注射器或微量吸移管恒溫水浴箱分光光度計(jì)研缽3藥品丙酮0.1%TTC溶液連二亞硫酸鈉NA2s2O4（保險(xiǎn)粉）三實(shí)驗(yàn)步驟1待測(cè)小麥種子浸泡至充分吸脹，取種胚（（30粒胚））或整粒種子。將樣品

7、放入試管中，加10ml0.1%TTC溶液，加蓋，放在38℃左右的恒溫水浴中（加蓋保持黑暗條件）。反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)短隨種子不同而異（2-3小時(shí)）。2反應(yīng)到一定時(shí)間，清出TTC以終止反應(yīng)，立刻用水沖洗樣品2—3次，以粗濾紙吸取浮水，將樣品倒入研缽，加少許分析純石英砂及丙酮，充分研磨，把研磨液倒入10ml的容量瓶中，再用丙酮沖洗研缽2—3次，全部倒入容量瓶，定容10ml。3提取液在4000g下離心10分鐘。4傾出紅色上清