葉綠體色素的提取.doc

《葉綠體色素的提取.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、葉綠體色素的提取、分離、理化性質(zhì)和含量測(cè)定Ⅰ提取與分離實(shí)驗(yàn)日期：2011.10.22實(shí)驗(yàn)者：XXX同組姓名：XXX一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)應(yīng)用薄層色譜法分離葉綠體色素的實(shí)驗(yàn)方法。2.了解葉綠素的組成、性質(zhì)和測(cè)定葉綠素有助于理解光合作用的本質(zhì)。二、實(shí)驗(yàn)原理:葉綠體是進(jìn)行光合作用的細(xì)胞器。葉綠體中的葉綠素a，葉綠素b，胡蘿卜素和葉黃素與類(lèi)囊體膜結(jié)合成為色素蛋白復(fù)合體。這些色素都不溶于水而溶于有機(jī)溶劑，故可用乙醇等有機(jī)溶劑提取。提取液可用薄層色譜法加以分離和鑒別。植物活性成分的分離常用薄層層析法和柱層析法，其中柱層析適用于大量制備。本實(shí)驗(yàn)采用薄層層析色譜法，其中固定相用硅膠預(yù)

2、制板。三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑:1.新鮮的菠菜葉片。2.體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，碳酸鈣粉末，展開(kāi)劑。3.研缽，漏斗，濾紙，三角瓶，剪刀，點(diǎn)樣毛細(xì)管，層析缸，硅膠預(yù)制板。四、實(shí)驗(yàn)步驟:（一）色素提取液的制備1.取新鮮葉片4~5片，洗凈，擦干葉表面，去除中脈剪碎（越碎越好），放入研缽中。2.向研缽中加入少量CaCO3，加2~3ml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，研磨至糊狀，再加10~15ml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，上清液用漏斗過(guò)濾出，殘?jiān)儆?0ml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇沖洗一次，一同過(guò)濾于三角瓶中，即制成葉綠體色素提取液。提取液應(yīng)盡量避光保存。因提取量較大，可用于其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)（即用于

3、后面的理化性質(zhì)的驗(yàn)證）。（二）葉綠體色素的分離1.取硅膠預(yù)制板一個(gè)，用點(diǎn)樣毛細(xì)管吸取上述提取液，平行于硅膠板的短邊，距下邊緣1cm處用毛細(xì)管劃線，自然風(fēng)干后劃第二次，重復(fù)操作3~4次，確保劃的濾液細(xì)線顏色足夠深，使分離結(jié)果更加明顯。2.取已經(jīng)加入適量展開(kāi)劑的層析缸，把硅膠預(yù)制板帶有色素的一端放入，使其下端浸入展開(kāi)劑中，但注意液面不可超出濾液細(xì)線。迅速改好層析缸蓋減少展開(kāi)劑的揮發(fā)對(duì)人體產(chǎn)生的不良影響。注意觀察展開(kāi)劑的擴(kuò)散過(guò)程，當(dāng)各種色素得到較好分離，且展開(kāi)劑前沿接近硅膠預(yù)制板上端邊緣處時(shí)，取出硅膠預(yù)制板迅速用鉛筆標(biāo)出展開(kāi)劑前沿和各色素帶的位置。注意要迅速，否則展開(kāi)劑前沿

4、很快會(huì)揮發(fā)消失，且前沿和各個(gè)色素帶的位置均會(huì)有微小變動(dòng)。3.測(cè)量出前沿和各個(gè)色素帶距離原點(diǎn)的距離并記錄。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（以圖輔助以文字展示）:.自上而下分別為：胡蘿卜素，葉綠素a，葉綠素b，葉黃素。各自到原點(diǎn)的距離：展開(kāi)劑前沿：8.50cm胡蘿卜素：8.10cm，Rf=0.95葉綠素a：6.70cm，Rf=0.79葉綠素b：6.30cm，Rf=0.74葉黃素：5.90cm，Rf=0.69事實(shí)上實(shí)驗(yàn)中不止看到了這四種色素帶，在它們下面還有一些分離出來(lái)的色素帶，但是不在本實(shí)驗(yàn)的討論范圍中，故不予考慮。Ⅱ理化性質(zhì)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模候?yàn)證葉綠體素的理化性質(zhì)。二、實(shí)驗(yàn)原理：1.葉

5、綠素可與堿起皂化反應(yīng)產(chǎn)生的鹽能溶于水中，因此可用此法分離葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素。2.葉綠素吸收光子而轉(zhuǎn)變成激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的葉綠素分子很不穩(wěn)定，當(dāng)它變回基態(tài)時(shí)可發(fā)射出紅光量子因而產(chǎn)生熒光。3.葉綠素的化學(xué)性質(zhì)很不穩(wěn)定，易受強(qiáng)光的破壞，特別是當(dāng)葉綠素與蛋白質(zhì)分離后，而類(lèi)胡蘿卜素則較穩(wěn)定。4.葉綠素中的鎂可以被H+取代而成褐色的去鎂葉綠素。去鎂葉綠素遇銅成為銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易被破壞，故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標(biāo)本。一、實(shí)驗(yàn)材料與試劑：1.新鮮菠菜葉片。2.葉綠素提取與分離實(shí)驗(yàn)中剩余的葉綠素提取液。3.小試管，試管架，水浴鍋（60℃和90℃各一個(gè)），1

6、0ml移液管，洗耳球，三角瓶。4.體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，笨，醋酸銅粉末，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的稀鹽酸，醋酸-醋酸銅溶液，氫氧化鉀-甲醇溶液。二、實(shí)驗(yàn)步驟：（一）光對(duì)葉綠素的破壞作用取2支小試管，各加入2.5ml葉綠體色素乙醇提取液，并用乙醇稀釋一倍。其中一支放在直射陽(yáng)光下，另一只用錫紙包嚴(yán)，40min后對(duì)比觀察顏色有何變化。（二）皂化作用（綠色素與黃色素的分離）1．取1支小試管加入3ml濃的葉綠素乙醇提取液，加入1ml氫氧化鉀-甲醇溶液，充分搖勻。2．片刻后，加入3ml苯，搖勻，再沿試管壁慢慢加入1ml左右蒸餾水，輕輕混勻（勿激烈搖蕩），然后置于試管架上靜置分層。若溶液不

7、分層，則用滴管吸取蒸餾水，沿管壁滴加，邊滴加邊搖動(dòng)，直到溶液開(kāi)始分層時(shí)靜置。（三）H+和Cu2+對(duì)葉綠素分子中Mg2+的取代作用1．取2支試管，第一支加葉綠體色素提取液5ml，作為對(duì)照。第二支試管加葉綠體色素提取液5ml后，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的稀鹽酸數(shù)滴，搖勻，觀察溶液顏色變化情況。當(dāng)溶液變褐后，再加入少量醋酸銅粉末，60℃水浴加熱，觀察溶液顏色變化情況，并與對(duì)照試管相比較。2．取新鮮菠菜葉片兩小片（能塞進(jìn)小試管即可），放入試管中，加醋酸-醋酸銅溶液，使之沒(méi)過(guò)葉片，90℃水浴加熱，隨時(shí)觀察葉片顏色的變化，直至顏色不再變化為止。（四）熒光現(xiàn)象的觀察實(shí)