總黃酮、多酚含量的測(cè)定.doc

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1、燕麥總黃酮含量的測(cè)定一、儀器紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、分析天平、低速離心機(jī)、超聲波提取器、恒溫水浴鍋、粉碎機(jī)、pH計(jì)、10mL容量瓶15個(gè)、10mL具塞試管、100mL燒瓶、10mL離心管10個(gè)、試管架2個(gè)二、藥品蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品40mg、無(wú)水乙醇1000mL、亞硝酸鈉500g、硝酸鋁500g、NaOH500g三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）、樣品處理及總黃酮的提取1.將樣品籽粒分別稱取2.5g置于小信封里，80℃烘干24h。2.研成粉末，稱取500±2mg樣品于10mL離心管中，使樣品位于試管底部（重復(fù)3次）。3.每管加4mL60％乙醇，放水浴鍋60℃浸提2h。6000r/min離心10min，離心后取

2、上清液于10mL容量瓶中。4.再向離心管中加4mL的60％乙醇，放水浴鍋60℃浸提1h。6000r/min離心10min，離心后取上清液于相應(yīng)的10mL容量瓶中。60％乙醇定容至10mL，待測(cè)。（二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制1.精確量取濃度200μg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL分別置于10mL容量瓶中。2.向容量瓶中分別加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、3.8、3.4、3.0mL。3.然后加5％亞硝酸鈉0.3mL，搖勻，靜置6min。4.再加10％硝酸鋁0.3mL，搖勻，靜置6min。5.加4％氫氧化鈉4.0mL，用60%的乙醇定容至刻度，搖

3、勻，靜置12min。6.于510nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，并以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)濃度值為縱坐標(biāo)，以吸光度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（三）、樣品提取液總黃酮含量的測(cè)定準(zhǔn)確吸取總黃酮提取液2.0mL于10mL容量瓶中，按二的方法測(cè)定吸光度，將吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣液的總黃酮含量。燕麥總酚含量的測(cè)定一、儀器紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、分析天平、低速離心機(jī)、恒溫水浴鍋、粉碎機(jī)、pH計(jì)、微波爐、回流裝置、25mL容量瓶、25mL具塞試管、250mL燒瓶二、藥品沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品100mg、無(wú)水乙醇1000mL、無(wú)水碳酸鈉500g、鹽酸500mL、福林酚試劑100mL三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）、樣品總酚的提取稱取2.0g粉碎

4、的燕麥粉于250mL燒瓶中，加入40mL體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液，提取液中鹽酸含量0.024%，攪拌均勻，在恒溫水浴鍋中安置好回流裝置，水浴溫度75℃，提取50min。提取液以3000r/min離心20min，取上清液，量取提取液體積，采用福林酚法測(cè)定燕麥提取液的總多酚濃度。（二）、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和樣品總酚含量的測(cè)定精確稱量沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品25mg，用水溶解后定容于250mL容量瓶中，得到0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。分別移取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.00、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50mL置于25mL具塞試管中，分別加入福林酚試劑1mL，搖勻后再分別加入質(zhì)

5、量分?jǐn)?shù)12%Na2CO3溶液2mL，用水定容至25mL，搖勻。平行三組。室溫下避光反應(yīng)2h后，在765nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。以沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸取1.00mL燕麥總多酚提取液于25mL具塞試管中，分別加入福林酚試劑1mL及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的碳酸鈉溶液2mL并定容至刻度，在室溫下避光反應(yīng)2h，在765nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品的吸光度，并根據(jù)工作曲線來(lái)計(jì)算提取液中的燕麥總多酚含量。