熒光法測(cè)定乙酰水楊酸和水楊酸課件.ppt

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1、熒光法測(cè)定乙酰水楊酸和水楊酸實(shí)驗(yàn)化學(xué)3-2（儀器分析實(shí)驗(yàn)）2021/8/71、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）掌握熒光法測(cè)定藥物中乙酰水楊酸的方法（2）了解CaryEclipse型熒光光譜儀的基本操作（3）強(qiáng)化稱量、移液、配溶液等基本操作2021/8/7實(shí)驗(yàn)原理電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時(shí)，通過(guò)輻射躍遷(發(fā)光)和無(wú)輻射躍遷等方式失去能量；傳遞途徑輻射躍遷熒光延遲熒光磷光內(nèi)轉(zhuǎn)移外轉(zhuǎn)移系間跨越振動(dòng)弛預(yù)無(wú)輻射躍遷激發(fā)態(tài)停留時(shí)間短、返回速度快的途徑，發(fā)生的幾率大，發(fā)光強(qiáng)度相對(duì)大；熒光：10-7～10-9s,第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)→基態(tài)；磷光

2、：10-3～10s；第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)→基態(tài)；2021/8/7S2S1S0T1吸收發(fā)射熒光發(fā)射磷光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫能量l2l1l3外轉(zhuǎn)換l?2T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫2021/8/7輻射能量傳遞過(guò)程熒光發(fā)射：電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)→基態(tài)（多為S1→S0躍遷），發(fā)射波長(zhǎng)為?‘2的熒光；10-7～10-9s。由圖可見，發(fā)射熒光的能量比分子吸收的能量小，波長(zhǎng)長(zhǎng)；?‘2>?2>?1；磷光發(fā)射：電子由第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)→基態(tài)（T1→S0躍遷）；電子由S0進(jìn)入T1的可能過(guò)程：（S0→T1禁阻躍遷）S0→激發(fā)→振

3、動(dòng)弛豫→內(nèi)轉(zhuǎn)移→系間跨越→振動(dòng)弛豫→T1發(fā)光速度很慢：10-3～10s。光照停止后，可持續(xù)一段時(shí)間。2021/8/7溶液濃度與熒光強(qiáng)度的關(guān)系有線性關(guān)系：熒光強(qiáng)度If正比于吸收的光量Ia和熒光量子效率?：If=?Ia由朗-比耳定律：Ia=I0(1-10-?lc)If=?I0(1-10-?lc)=?I0(1-e-2.3?lc)濃度很低時(shí)，將括號(hào)項(xiàng)近似處理后：If=2.3?I0?lc=Kc2021/8/7分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件1）具有合適的結(jié)構(gòu)；2）具有一定的熒光量子產(chǎn)率。熒光量子產(chǎn)率（?）：熒光量子產(chǎn)率與激發(fā)態(tài)能量釋放各過(guò)程的速率

4、常數(shù)有關(guān)，如外轉(zhuǎn)換過(guò)程速度快，不出現(xiàn)熒光發(fā)射；2021/8/7儀器結(jié)構(gòu)流程測(cè)量熒光的儀器主要由四個(gè)部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測(cè)器。特殊點(diǎn)：有兩個(gè)單色器，光源與檢測(cè)器通常成直角?；玖鞒倘鐖D：?jiǎn)紊鳎哼x擇激發(fā)光波長(zhǎng)的第一單色器和選擇發(fā)射光(測(cè)量)波長(zhǎng)的第二單色器；光源：燈和高壓汞燈，染料激光器(可見與紫外區(qū))檢測(cè)器：光電倍增管。2021/8/7熒光分析方法特點(diǎn)1）靈敏度高比紫外-可見分光光度法高2～4個(gè)數(shù)量級(jí)；為什么？檢測(cè)下限：0.1～0.1?g/cm-3相對(duì)靈敏度：0.05mol/L奎寧硫酸氫鹽的硫酸溶液。2）選

5、擇性強(qiáng)既可依據(jù)特征發(fā)射光譜，又可根據(jù)特征吸收光譜；3）試樣量少缺點(diǎn)：應(yīng)用范圍小。2021/8/7儀器與試劑儀器：CaryEclipse熒光光譜儀，石英比色皿，容量瓶，移液管，玻璃注射器，漏斗，量筒，濾紙。試劑：乙酰水楊酸，水楊酸，乙醇，阿司匹林藥片。2021/8/7實(shí)驗(yàn)步驟1、ASA和SA貯備溶液的配制（1）ASA貯備液的配制：稱取0.4000g乙酰水楊酸溶于1％醋酸-氯仿溶液中，用1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，搖勻，備用；（2）SA貯備液的配制：稱取0.750g水楊酸溶于1％醋酸—氯仿溶液中，用1％醋酸—氯仿溶液

6、定容于1000mL容量瓶中，搖勻，備用。2、ASA和SA激發(fā)光譜和熒光光譜的繪制將ASA和SA貯備液分別稀釋100倍(分二次完成，每次稀釋10倍)。用得到的溶液分別掃描ASA和SA的激發(fā)光譜和熒光光譜曲線，并分別確定它們的最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)。3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作(1)ASA標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用移液管分別準(zhǔn)確移取濃度為4.00μg·mL-1的ASA溶液2、4、6、8、10mL至5只50mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀至刻度，搖勻。分別測(cè)量它們的熒光強(qiáng)度.(2)SA標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用移液管分別準(zhǔn)確移取濃度為7.5μg·mL-1的S

7、A溶液2、4、6、8、l0mL至5只50mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻。分別測(cè)量它們的熒光強(qiáng)度．2021/8/74、阿斯匹林藥片中乙酰水楊酸和水楊酸的測(cè)定取5片阿司匹林藥片磨成粉末，準(zhǔn)確稱取0.40mg用1％醋酸—氯仿溶液溶解，全部轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀釋至刻度。迅速通過(guò)定量濾紙干過(guò)濾，用該濾液在與標(biāo)準(zhǔn)溶液同樣的測(cè)定條件下測(cè)量SA熒光強(qiáng)度。將上述濾液稀釋1000倍(用三次稀釋來(lái)完成)，在與標(biāo)準(zhǔn)溶液同樣的測(cè)定條件下測(cè)量ASA熒光強(qiáng)度。數(shù)據(jù)處理1、從繪制的ASA和SA激發(fā)光譜和熒光光譜曲線

8、上，確定它們的最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)。2、分別繪制ASA和SA的標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定試樣溶液中ASA和SA的濃度，并計(jì)算每片阿斯匹林藥片中ASA和SA的含量(mg)，將ASA測(cè)定值與說(shuō)明書上的值比較。2021/8/7實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)1、溶劑用量控