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1、酵母雙雜交系統(tǒng)（yeasttwo-hybridsystem）定義(Defination)1背景（Background）2原理（Principle）3特征（Character）5過程（Process）4應(yīng)用（Application）6定義（Defination）將待研究的兩種蛋白質(zhì)的基因分別克隆到酵母表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子(如GAL4等)的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域基因和激活結(jié)構(gòu)域基因，構(gòu)建成融合表達載體，從表達產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。BACK背景（Background）真核生物基因轉(zhuǎn)錄需要反式轉(zhuǎn)錄激活因子（如Gal4等）的參與，真核生物轉(zhuǎn)錄因
2、子含有兩個不同的結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-bindingdomain）及轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（activationdomain）。前者可識別DNA上的特異序列，并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)的基因的上游，后者可同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用，啟動它所調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄。Fig.Gal4boundtoitssiteonDNABACK原理（Principle）酵母轉(zhuǎn)錄因子（1）誘餌蛋白（Bait,與BD融合）（2）靶蛋白（TargetproteinorPrey,與AD融合）報告基因LacZ、HIS、GFP、RFP、GUS、NOS等均可作為報告基因酵母
3、雙雜交系統(tǒng)由Fields和Song等首先在研究真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中建立。原理（Principle）ADPreyADPreyBaitDNA-BDGAL4UASPromoterlacZ(orHIS)reportergenetranscriptionGAL4UASPromoterlacZ(orHIS)reportergeneGAL4UASPromoterlacZ(orHIS)reportergeneBaitDNA-BDBACK1、將蛋白X的cDNA序列與BD序列融合，構(gòu)建成誘餌質(zhì)粒。2、將蛋白Y的cDNA序列與AD序列融合，構(gòu)建成文庫質(zhì)粒。過程（Pr
4、ocess）過程（Process）3、將這兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入酵母細胞（缺乏報告基因啟動子）中。4、利用報告基因的表達篩選相互作用的蛋白（文庫篩選）。BACK優(yōu)點高敏感性真實性簡潔性廣泛性特征（Character）缺點假陽性較多轉(zhuǎn)化效率低陰性干擾BACK應(yīng)用（Application）分析已知蛋白之間的相互作用對蛋白質(zhì)功能域的分析，如可將待測蛋白質(zhì)進行點突變或缺失突變再進行雙雜交。用已知功能蛋白質(zhì)篩選雙雜交cDNA文庫，研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑，發(fā)現(xiàn)新基因。分析新基因的生物學(xué)功能。即以功能未知的新基因去篩選文庫，再根據(jù)篩的已知基因推測新基因功
5、能。繪制蛋白質(zhì)相互作用系統(tǒng)圖譜在藥物設(shè)計中的應(yīng)用利用酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的新功能將已知基因作為誘餌，在選定的cDNA文庫中篩選與誘餌蛋白相互作用的蛋白，從篩選到的陽性酵母菌株中可以分離得到AD-文庫載體，并從載體中進一步克隆得到隨機插入的cDNA片段，并對該片段的編碼序列在GENEBANK中進行比較，研究與已知基因在生物學(xué)功能上的聯(lián)系。應(yīng)用（Application）利用酵母雙雜交在細胞體內(nèi)研究抗原和抗體的相互作用應(yīng)用（Application）利用酶聯(lián)免疫（ELISA）、免疫共沉淀（CO-IP）技術(shù)都是利用抗原和抗體間的免疫反應(yīng)，可
6、研究抗原和抗體之間的相互作用，但它們都是基于體外非細胞的環(huán)境中研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用。而在細胞體內(nèi)的抗原和抗體的聚積反應(yīng)則可以通過酵母雙雜交進行檢測。利用酵母雙雜交篩選藥物的作用位點以及藥物對蛋白質(zhì)之間相互作用的影響應(yīng)用（Application）對于能夠引發(fā)疾病反應(yīng)的蛋白相互作用可采取藥物干擾的方法，阻止它們的相互作用以達到治療疾病的目的。利用酵母雙雜交建立基因組蛋白連鎖圖（GenomeProteinLinkageMap）應(yīng)用（Application）基因組中的編碼蛋白質(zhì)的基因之間存在著功能上的聯(lián)系。通過基因組的測序和序列分析發(fā)現(xiàn)了很多
7、新的基因和EST序列。利用酵母雙雜交技術(shù)，將所有已知基因和EST序列為誘餌，在表達文庫中篩選與誘餌相互作用的蛋白，從而找到基因之間的聯(lián)系，建立基因組蛋白連鎖圖。對于認(rèn)識一些重要的生命活動：如信號傳導(dǎo)、代謝途徑等有重要意義。利用酵母雙雜交建立基因組蛋白連鎖圖（GenomeProteinLinkageMap）應(yīng)用（Application）基因組中的編碼蛋白質(zhì)的基因之間存在著功能上的聯(lián)系。通過基因組的測序和序列分析發(fā)現(xiàn)了很多新的基因和EST序列。利用酵母雙雜交技術(shù)，將所有已知基因和EST序列為誘餌，在表達文庫中篩選與誘餌相互作用的蛋白，從而找到基因
8、之間的聯(lián)系，建立基因組蛋白連鎖圖。對于認(rèn)識一些重要的生命活動：如信號傳導(dǎo)、代謝途徑等有重要意義。BACKThankyou
