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1、精品文檔志賀氏菌檢測1設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1.1恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃；1.2冰箱：2℃～5℃；1.3膜過濾系統(tǒng)；1.4厭氧培養(yǎng)裝置：41.5℃±1℃；1.5電子天平：感量0.1g；1.6顯微鏡：10×～100×；1.7均質(zhì)器；1.8振蕩器；1.9無菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸頭；1.10無菌均質(zhì)杯或無菌均質(zhì)袋：容量500ml；1.11無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm；1.12pH計或pH比色管或精密pH試紙；1.13全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。2培養(yǎng)基和試劑3.1志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素：見附錄中
2、1。3.2麥康凱（MAC）瓊脂：見附錄中2。3.3木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽（XLD）瓊脂：見附錄中3。3.4三糖鐵（TSI）瓊脂：見附錄中4。3.5營養(yǎng)瓊脂斜面：見附錄中5。3.6半固體瓊脂：見附錄中6。3.7葡萄糖銨培養(yǎng)基：見附錄中7。3.8尿素瓊脂：見附錄中8。3.9β-半乳糖苷酶培養(yǎng)基：見附錄中9。3.10氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基：見附錄中10。3.11糖發(fā)酵管：見附錄中11。1歡迎下載。精品文檔3.12西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基：見附錄中12。3.13粘液酸鹽培養(yǎng)基：見附錄中13。3.14蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑：見附錄中14。3.15志賀氏菌屬診斷血清。3.16生化鑒定試劑盒。4操作步驟4.1增菌
3、以無菌操作取檢樣25g（ml），加入裝有滅菌225ml志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min～10000r/min均質(zhì)；或加入裝有225ml志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì)1min～2min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5℃±１℃，厭氧培養(yǎng)16h～20h。4.2分離取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上，于36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進行觀察。志賀氏菌在不同
4、選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表1。表1志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板志賀氏菌的菌落特征MAC瓊脂無色至淺粉紅色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊XLD瓊脂粉紅色至無色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊4.3初步生化試驗4.3.1自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，分別接種TSI、半固體和營養(yǎng)瓊脂斜面各一管，置36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h，分別觀察結(jié)果。4.3.2凡是三糖鐵瓊脂中斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸（發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，蔗糖）、不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體）、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無動力的菌株，挑取其4.3.1中已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊
5、脂斜面上生長的菌苔，進行生化試驗和血清學(xué)分型。4.4生化試驗及附加生化試驗2歡迎下載。精品文檔4.4.1生化試驗用4.3.1中已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔，進行生化試驗，即β-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗。除宋內(nèi)氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌13型的鳥氨酸陽性；宋內(nèi)氏菌和痢疾志賀氏菌1型，鮑氏志賀氏菌13型的β-半乳糖苷酶為陽性以外，其余生化試驗志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。另外由于福氏志賀氏菌6型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相似，必要時還需加做靛基質(zhì)、甘露醇、棉子糖、甘油試驗，也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性
6、桿菌。生化反應(yīng)不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬。志賀氏菌屬生化特性見表2。表2志賀氏菌屬四個群的生化特征生化反應(yīng)A群：痢疾志賀氏菌B群：福氏志賀氏菌C群：鮑氏志賀氏菌D群：宋內(nèi)氏志賀氏菌β-半乳糖苷－a－－a+酶尿素－－－－賴氨酸脫羧酶－－－－鳥氨酸脫羧酶－－－b+水樣苷－－－－七葉苷－－－－靛基質(zhì)－/+（+）－/+－甘露醇－+c++棉子糖－+－+甘油（+）－（+）d注：+表示陽性；－表示陰性；－/+表示多數(shù)陰性；+/－表示多數(shù)陽性；（+）表示遲緩陽性；d表示有不同生化型。a痢疾志賀1型和鮑氏13型為陽性。b鮑氏13型為鳥氨酸陽性。c福氏4型和6型常
7、見甘露醇陰性變種。4.4.2附加生化實驗3。歡迎下載精品文檔由于某些不活潑的大腸埃希氏菌（anaerogenicE.coli）、A-D（Alkalescens-Disparbiotypes堿性-異型）菌的部分生化特征與志賀氏菌相似，并能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集；因此前面生化實驗符合志賀氏菌屬生化特性的培養(yǎng)物還需另加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(36℃培養(yǎng)24h～48h)。志賀氏菌屬和不活潑大腸
