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1、蛋白質銀染原理與方法2009-04-2816:38:24來源:未知【大中小】評論:條-摘要：蛋白質條帶的銀染是基于蛋白質中各種基團（如琉基、碳基等）與銀的結合，檢測極限是2～5.0ng／蛋白條帶。原理：蛋白質條帶的銀染是基于蛋白質中各種基團（如琉基、碳基等）與銀的結合，檢測極限是2～5.0ng／蛋白條帶。①SDS-PAGE電泳。注意：銀染檢測蛋白質的水平是在100ng左右，與CommassieBlue染色比較，銀染加樣量要少。否則難以得到清晰的電泳分辨率。②電泳結束后，戴手套將PAGE膠轉移到干凈的玻璃培養(yǎng)皿或TIP頭盒
2、蓋中。加入25mlFixingSolution（固定液），室溫振蕩保溫30min。膠需要完全淹沒在固定液中。③徹底棄去固定液，加入25mlIncubationSolution（保育液），室溫振蕩保溫30min。膠需要完全淹沒在保育液中。④徹底棄去IncubationSolution（保育液），用50ml去離子水洗3次，每次5min。⑤準備：取2.5ml10XSilveringSolution,加入22.5mL水，混勻后使用。⑥棄去洗滌的水，加入25mlSilveringSolution(銀染液)。室溫振蕩保溫20min。
3、⑦徹底棄去銀染液，加入25mLDevelopingSolution（顯色液），室溫振蕩保溫1~10min。注意觀察目的條帶。如果目的條帶出現(xiàn)了，可以考慮終止顯色。顯色時間不要過長，否則本底較深。⑧徹底棄去顯色液,加入25mLStoppingSolution（終止液），室溫振蕩保溫10min。⑨徹底棄去StoppingSolution（終止液），用50mL去離子水洗3次，每次5min。棄去洗滌的水，加入25mLPreservingSolution（保護液），室溫振蕩保溫20min。銀染PAGE膠可以拍照保存，也可以室溫玻璃
4、紙干燥。今天第一次銀染，結果出來啥也沒有，凝膠就像一塊海帶一樣。能不能提供詳細的銀染步驟呢？好像有好幾種版本，哪位大俠有經(jīng)驗的希望能點撥一下？hotstoewrote:1.取下凝膠,蒸餾水冼膠30秒.2.0.1%硝酸銀染色10分鐘.3.棄去染色液,蒸餾水洗膠1分鐘.4.顯色液顯色15秒,換用新的顯色液,顯清條帶為止.顯色液配方:10克氫氧化鈉+0.2克碳酸鈉+2m甲醛溶液,定溶到500ml.這個染色方法挺好的,我用過.注意染色時間不能長.我的經(jīng)驗是：1.取下凝膠用去離子水冼膠30秒三次，2.0.1%硝酸銀染色10分鐘.3
5、.棄去染色液,蒸餾水洗膠1分鐘（換2次去離子水）4.顯色液顯色15秒,換用新的顯色液,顯清條帶為止.不要試圖將所有的條帶都顯出來，要求越高可能導致背景就深，5.染色后要用固定液（冰乙酸）終止染色，6.固定3分鐘后再用去離子水洗滌2遍（整個試驗比較費去離子水）。多謝各位的指導!我現(xiàn)在是在12%的凝膠里加入丙三醇優(yōu)化.現(xiàn)在的問題是背景和條帶都很淺.仍能分辨讀出條帶數(shù),但是拍攝出來的還是不清楚.請問有必要提高硝酸銀的濃度嗎?(我現(xiàn)在用的是0.15%的硝酸銀)向各位請教幾個關于TRAP-銀染的問題，多謝各位指教。我用的是鼎國的試
6、劑盒做的TRAP，用的是8%聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后是銀染，但是結果很令人失望，電泳的膠取下來的時候竟然破成了好幾片，染色后也看不出什么結果，我想問的是TRAP-銀染，這個實驗成功的關鍵步驟在哪里，哪一步最容易出問題？銀染后理想的結果應該是什么樣子的？請說的具體點好嗎，謝謝。背景是什么樣的比較好，還有條帶應該是什么顏色，有多深，什么樣的。謝謝了！我的做法是這樣的，染色效果還可以10%的乙醇固定10分鐘，ddH2O洗一次，2分鐘。1%的硝酸脫色4分鐘，ddH2O洗兩次，每次1分鐘。0.2%AgNO3染色20分鐘，ddH2O
7、洗三次，每次1分鐘。NaCO3-甲醛顯色至條帶出現(xiàn)。我的感覺是乙醇和硝酸重復使用的次數(shù)不要太多，這樣效果不好，NaCO3-甲醛得質量很關鍵，我們有一次換了試劑，效果非常差。1)10%乙醇，5min；2)雙蒸水過水2次（短暫）；3)1%硝酸，5min；4)雙蒸水過水；5)0.2%硝酸銀，在搖床搖動10min；6)雙蒸水過水（不超過5sec）；7)顯影液顯影，邊晃動邊顯影，至顯影滿意為止；8)10%冰乙酸固定，至無氣泡；9)40℃烘箱，3天；10)剝離，保存。Notes:顯影液的配制：無水碳酸鈉3.09g甲醛100ulm硫代
8、硫酸鈉（1%）10ul雙蒸水100ml銀染法分以下幾個程序：1、固定2、敏化3、銀育4、顯影5、停顯此外，其間還有數(shù)步的漂洗程序。在你的銀染方法中沒有敏化過程，不過也中可以的，只是靈敏度會下降。銀染法還可分為堿性銀染和酸性銀染法，你的方法為酸性銀染法。為何稱為酸法？是指硝酸銀這一強酸弱堿鹽溶液因水解呈酸性而得名？何為
