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1、分類號＆32墨：lUDC量2窆密級坌玨編號—10299S0—814006桂皮醛抑制耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)生物膜形成的實(shí)驗(yàn)研究EXPElUMENTALSTUDYONINHIBITIONEFFECTOFBIoFILMFORMATIONOFMETHICILLIN—RESISTANTSTAPHYLoCoCcUSAUREUS(MRSA)BYCINNAMALDEHYDE指導(dǎo)教師：邵世和教授?作者姓名：賈蓓蓓，。申請學(xué)位：醫(yī)學(xué)碩士‘專業(yè)名稱：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文提交日期：2011年4月27日論文答辯日期：2
2、011年6月7日學(xué)位授予單位和日期：江蘇大學(xué)(2011年6月)答辯委員會主席：嚴(yán)杰教授評閱人：獨(dú)創(chuàng)性聲明蚴JIIlIlllIlIIJlllIllllllllrrlIIIlfl丫1894765本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為：茯得江蘇大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明
3、的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：鋤霍泖7年占月／徊學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書江蘇大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所、國家圖書館、中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本論文編入《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》并向社會提供查詢，授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社將本論文編入《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》并向社會提供查詢。論文的公布(
4、包括刊登)授權(quán)江蘇大學(xué)研究生處辦理。?本學(xué)位論文屬于不保密’日。學(xué)位論文作者簽名：鋤棰2,or／年易月／廣日江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的：分別通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究證明桂皮醛(cinnamaldehyde，CA)對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin—resistantStaphylococcusaureus，MRSA)形成生物膜的抑制作用；并檢測桂皮醛對MRSA生物膜形成關(guān)鍵基因sarA以及體內(nèi)試驗(yàn)動物血清中炎癥因子IL-Ip的影響，為進(jìn)一步探討桂皮醛的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法：1．將實(shí)驗(yàn)菌株
5、(包括6株MRSA和1株標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25923)接種L．B瓊脂平板，37"C培養(yǎng)24h，然后行K．B法和微量瓊脂稀釋法藥敏試驗(yàn)，測得抑菌環(huán)直徑，最低抑菌濃度(minimuminhibitoryconcentration，MIC)和最低殺菌濃度(minimumbactericidalconcentration，MBC)；2．利用96孔板法構(gòu)建MRSA生物膜，分別加入不同濃度的藥物(包括O．5×，1×，2．5×和5xMIC)，作用24h后分別采用MTT法和菌落計(jì)數(shù)法測定生物膜內(nèi)細(xì)菌數(shù)量的變化；3．分別采用
6、掃描電子顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡對上述桂皮醛對MRSA生物膜的作用加以驗(yàn)證；4．利用PCR方法檢測各待測菌株內(nèi)有無icaA和sarA兩種基因；5．不同濃度的桂皮醛作用MRSA生物膜24h后，提取細(xì)菌細(xì)胞桂皮醛抑制耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)生物膜形成的實(shí)驗(yàn)研究總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測用藥前后sarAmRNA水平的變化；6．在體內(nèi)，采用皮下羧甲基纖維素鈉(CMC)一囊袋法制備MRSA在SD大鼠體內(nèi)的生物膜模型，并給模型大鼠分別連續(xù)腹腔注射桂皮醛(cinnamaldehyd
7、e，CA)30、45、60(mg／(kg．d))4d，同時設(shè)生理鹽水對照組和生物膜模型組；7．在給藥后的第1d、3d、5d采集菌液進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，末次給藥后24h斷頭取血，收集病變組織，進(jìn)行病理切片觀察；用RT．PCR檢測血中IL-lfimRNA的變化；用酶聯(lián)免疫法測定血清中IL．1p含量的變化。結(jié)果：1．從K．B法藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出：抑菌環(huán)直徑隨加藥濃度的增大而增大。當(dāng)加藥濃度為4％(v／v)時，各測試菌株的抑菌環(huán)直徑均>26mm，達(dá)到了藥敏試驗(yàn)敏感的范圍；微量瓊脂稀釋法測得各待測菌株的MIC和MBC值
8、的范圍分別為0．0625％．0．125％(v／v)和0．25％-0．5％(吶)；2．96孔板法成功制備MRSA生物膜；加入不同濃度藥物后，MTT法和菌落計(jì)數(shù)法測得的結(jié)果一致，即隨加藥濃度的增大，生物膜內(nèi)菌落數(shù)量減少；3．掃描電子顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡下分別觀察到桂皮醛對MRSA形成生物膜的破壞作用，且隨加藥濃度的增大，生物膜結(jié)構(gòu)破壞越大，膜內(nèi)菌落數(shù)越少；II江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文4．PCR結(jié)果顯示各測試菌株均無icaA基因，而
