天狼星紅染色.doc

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1、苦味酸天狼猩紅染色：取出培養(yǎng)箱內(nèi)的CFs培養(yǎng)板，取出爬片，標記↓PBS洗，5min×3次↓4%多聚甲醛固定15min↓PBS洗，5min×3次↓天青石藍液染5-10分鐘↓PBS洗5min×3次↓苦味酸天狼星紅液染15-30分鐘↓PBS洗5min×3次↓蘇木精復(fù)染5-10min↓90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇脫水↓二甲苯透明，中性塑膠封固↓倒置顯微鏡下觀察結(jié)果并照相保存↓染色結(jié)果I型膠原呈亮紅色或黃色，III型膠原位于I型膠原的周邊呈綠色[試劑配制](1)天狼星紅飽和苦昧酸液：0.5％天狼星紅10ml，苦味酸飽和

2、液90ml。(2)天青石藍液：天青石藍B1.25g，鐵明礬1.25g，蒸餾水250ml。溶解煮沸、待冷卻過濾。加入甘油30ml，然后再加入濃鹽酸0.5ml。[注]：偏光顯微鏡觀察膠原纖維。l型膠原纖維：緊密排列，顯示很強的雙折光性，呈黃色或紅色的纖維。II型膠原纖維：顯示弱的雙折光，呈多種色彩的疏松網(wǎng)狀分布。III型膠原纖維：顯示弱的雙折光，呈綠色的細纖維。lv型膠原纖維：顯示弱的雙折光的基膜，呈淡黃色。