擬南芥AtGPAT9基因cDNA的克隆及其轉化大豆的研究-論文.pdf

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1、第31卷第6期大豆科學V0l-31No．62Ol2年l2月S0YBEANSCIENCEDec．2Ol2擬南芥基因cDNA的克隆及其轉化大豆的研究吳興，趙歡歡，張鋒，李宏偉，王茅雁(內蒙古農業(yè)大學生命科學學院，內蒙古呼和浩特010018)摘要：甘油3一磷酸?；D移酶(Glycero1．3．．phosphateaeyhransferases，GPATs；EC2．3．1．15)是植物種子中儲藏性油脂三脂酰甘油(Triaeylglycerols，TAGs)合成中的一個關鍵酶，它催化甘油-3一磷酸分子sn一1位的?；磻?，形成溶血磷酯酸(Lysophosphatidicacid，L

2、PA)，從而起動TAGs的生物合成。擬南芥內質網(wǎng)中表達的AtGPAT9在此過程中可能起著重要作用。運用RT．PCR方法克隆到AtGPAT9基因的編碼區(qū)cDNA，并構建了其植物表達載體，然后通過農桿菌介導的子葉節(jié)法對大豆進行了遺傳轉化，獲得抗草丁膦(Phosphinothricin／PPT)篩選劑的再生植株。關鍵詞：甘油一3．磷酸?；D移酶；基因克??；大豆轉化中圖分類號：s565．1文獻標識碼：A文章編號：1000-9841(2012)06-0878-04CloningofAtGPAT9cDNAfromArabidopsisandItsTransformationofSoy

3、beanWUXing，ZHAOHuan-huan，ZHANGFeng，LIHong·wei，WANGMao-yan(CollegeofLifeSciences，InnerMongoliaAgfieultur~University，Hohhot010018，InnerMongolia，China)Abstract：Glycerol-3一phosphateaeyhransferases(GPATs)playcrucialroleinthebiosynthesisoftriacylglyeerols(TAGs)whicharemajorformofthestorageoilsa

4、ccumulatedindevelopingseeds，andtheenzymescatalyzetheacylationofglycerol一3一phos—ph~teatthesn一1positionandresultintheformationoflysophosphatidieacid．whichistheinitialstepofTAGbiosynthesis．Theendoplasmicreticulum—expressedAtGPAT9，amemberoftheGPATfamilyinArabidopsisthaliana，waspredictedtoplay

5、anim—portantroleinthereaction．Inthepresentstudy，thecompletecodingregioncDNAofAtGPAT9wasclonedbyusingreversetranscfiptase—mediatedPCR，andthegene’splantexpressionvectorwasconstructed．Thensoybeantransformationwasper—formedbytheAgrobacteriumtumefaciens—mediatedcotyledonnodemethod，andtheregene

6、ratedplantsresistanttoselectivea-gentphosphinothricin／PPTwereobtained．Keywords：Glycerol一3一phosphateacyltransferases(GPATs)；Genecloning；Transformationofsoybean三脂酰甘油(Triacylglycerol，TAG)是植物種子為高油份植物J。目前在其基因組中共鑒定出9中主要的儲藏性油脂，其生物合成是通過前體物甘個編碼膜結合型GPAT的基因。，其中AtGPAT1主油一3一磷酸分子被脂酰輔酶A中的脂肪?；B續(xù)酯要與花粉發(fā)育和種

7、子油份的組成有關，AtGPAT4、化而完成的。甘油．3一磷酸?；D移酶(Glycerol一3一A和AtGPA1"8主要參與軟木脂或角質的合phosphateacyhransferases，GPATs)可催化甘油_3一磷成?，其余幾個基因的功能尚未見報道。AtG．酸分子sn．1位的酰化反應，形成溶血磷酯酸(Lyso—PAT9與其他8個擬南芥GPAT蛋白的同源性很低phosphatidicacid，LPA)，后者再經(jīng)過連續(xù)2次?；?3％的一致性和17％的相似性)，而與哺乳動物的反應而形成TAGs【lJ。因此，GPATs是TAGs生