高效液相色譜測(cè)定苯萘蒽的含量.doc

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1、高效液相色譜測(cè)定苯萘蒽的含量一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?熟悉HPLC的結(jié)構(gòu)和操作2了解反相高效液相色譜法3掌握峰面積歸一化法定量方法二實(shí)驗(yàn)原理1儀器結(jié)構(gòu)儲(chǔ)液器→高壓泵→進(jìn)樣器→色譜柱→檢測(cè)器→記錄儀↓↓梯度洗脫餾分收集器2分離原理在反相高效液相色譜中其分離原理取決于組分與固定相間作用力的大小差異，組分的非極性相對(duì)最強(qiáng)，與固定相作用最強(qiáng)，故保留時(shí)間最長(zhǎng)，最后被洗脫。3歸一化法（1）定量校正因子：fi’即mi=fi’*Ai（2）實(shí)驗(yàn)一般用相對(duì)定量校正因子：fifi=As*mi/Ai*ms式中i指樣品；s指標(biāo)準(zhǔn)品，用各

2、組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品可求出各組分的fi（3）求各組分含量Xi=Ai*fi/(A1f1+A2f2+…Anfn)*100%三儀器與試劑1shimudza高效液相色譜儀，7725i手動(dòng)進(jìn)樣伐，微量注射器（25μL）,C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,超聲波脫氣機(jī)，抽濾器。2試劑：甲醇、苯、萘和蒽均為分析純，水為二次蒸餾水，苯、萘和蒽標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度均為100μg/mL），未知濃度的苯、萘和蒽混合溶液。四實(shí)驗(yàn)步驟1將實(shí)驗(yàn)用流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾和脫氣處理2開(kāi)機(jī)，依次打開(kāi)泵、檢測(cè)器、工作站。調(diào)整色譜條件（檢測(cè)波長(zhǎng)

3、：254mnv=1.0mL/min,流動(dòng)相，甲醇：水=80：20，柱溫：室溫），平衡色譜系統(tǒng)。3基線平穩(wěn)后，取混合溶液5μL進(jìn)樣，記錄各峰tR和A，重復(fù)兩次。分別取苯、萘和蒽的標(biāo)準(zhǔn)溶液各5μL，依次進(jìn)樣，以確定混合物中各組分的峰的位置。4清洗色譜柱，關(guān)機(jī)。五結(jié)果處理1根據(jù)純品的出峰時(shí)間，確定混合物中各組分出峰順序。2以苯為標(biāo)準(zhǔn)物，計(jì)算各組分的相對(duì)定量（質(zhì)量）校正因子。3計(jì)算樣品中各組分的百分含量。六思考題1歸一化法定量有何優(yōu)缺點(diǎn)？如果樣品中各組分不能完全流出時(shí)，用此方法定量是否合適？為什么？2解釋

4、樣品中各組分的洗脫順序。如果用純甲醇作為流動(dòng)相，則各組分保留時(shí)間如何變化？對(duì)定量結(jié)果有無(wú)影響？