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《ripa裂解液說明書c1053》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、普利萊基因技術(shù)有限公司www.applygen.com.cn電話：010-62027915,62053186Email:sale@applygen.com.cnRIPA裂解緩沖液(RIPALysisBuffer，#C1053)描述：RIPA裂解緩沖液，提供完整的細(xì)胞蛋白制備方案。RIPA裂解液(RIPALysisBuffer)對動物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，是經(jīng)典和最常用的細(xì)胞組織快速裂解液。使用RIPABuffer制備用于Western特別是用于免疫共沉淀的裂解產(chǎn)物已經(jīng)是一種首
2、選的標(biāo)準(zhǔn)操作，適用于大部分抗原表位的檢測，特別適用于免疫共沉淀檢測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間的相互作用。我們提供的RIPABuffer的成分為：50mMTris-HCl(pH7.4),150mMNaCl,1%NP-40,0.1%SDS，適于westernblot和絕大多數(shù)蛋白-蛋白相互作用的免疫共沉淀。組成：100mlRIPABuffer：50mMTris-HCl(pH7.4),150mMNaCl,1%NP-40,0.1%SDS.儲存：4oC。制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物1.800g4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計(jì)
3、細(xì)胞離心后的體積（PCV,106cells=~20ml,107cells=~100mlPCV）；2.每50～100mlPCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液（250~500ml）,冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；3.12000g4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物；4.假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。制備組織裂解產(chǎn)物1.取50-100mg組
4、織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；2.加入0.5-1ml預(yù)冷RIPA裂解緩沖液；3.4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；4.12000g4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；5.假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；6.20％的甘油保存于-70oC或-20oC。注
5、意：1.在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；2.在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；3.在該RIPA裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑。Page1of1ApplygenTechnologiesInc.RevDoc0706
