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《不同采血管對(duì)核酸檢測(cè)結(jié)果的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、不同采血管對(duì)核酸檢測(cè)結(jié)果的影響采用核酸檢測(cè)(NAT)技術(shù)對(duì)獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行篩查，采血管是提高血液安全性的重要舉措。NAT技術(shù)的靈敏度極高，其縮短檢測(cè)窗口期的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血清學(xué)方法，但是如果標(biāo)本的采集、處理、保存不當(dāng)，會(huì)造成病毒核酸降解，從而影響檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性，降低核酸檢測(cè)本身的靈敏度，對(duì)血液安全帶來(lái)潛在風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)此，試劑和采血管的廠方說(shuō)明書都提出了各自對(duì)于標(biāo)本處理的指導(dǎo)意見(jiàn)。但是不同實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本采集過(guò)程，運(yùn)輸、保存條件不盡相同，對(duì)標(biāo)本質(zhì)量的影響也存在差異。為確保血液標(biāo)本滿足NAT檢測(cè)要求，我們采用不同的試驗(yàn)方案
2、，驗(yàn)證不同品牌無(wú)菌無(wú)RNAase真空采血管、保存溫度、離心前保存時(shí)間等對(duì)NAT檢測(cè)結(jié)果的影響。為選擇符合NAT要求的采血管、優(yōu)化標(biāo)本控制過(guò)程、制定核酸檢測(cè)策略等提供數(shù)據(jù)支持。???1材料與方法???1.1材料1)采血管:從市售采血管中選擇3種EDTAK2抗凝的，有分離膠，一次性無(wú)菌無(wú)RNAase真空采血管，根據(jù)生產(chǎn)廠家不同，稱為A、B、C采血管。2)檢測(cè)標(biāo)本:試驗(yàn)用陰性標(biāo)本:對(duì)獻(xiàn)血者全血標(biāo)本進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)和NAT檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果呈HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、HBVDNA、HCVRNA、HIV-1RNA陰
3、性的標(biāo)本進(jìn)行匯集，作為試驗(yàn)用陰性標(biāo)本。試驗(yàn)用HBV陽(yáng)性血漿:從HBsAg、HBVDNA檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，其余項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果呈陰性的獻(xiàn)血者全血標(biāo)本中分離的血漿，經(jīng)HBVDNA定量檢測(cè)，HBV濃度為1.24×104IU/ml。試驗(yàn)用HCV陽(yáng)性血漿:從抗-HCV、HCVRNA檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，其余項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果呈陰性的獻(xiàn)血者全血標(biāo)本中分離的血漿，經(jīng)HCVRNA定量檢測(cè)，HCV濃度為6.88×103IU/ml。試驗(yàn)用HIV-1陽(yáng)性血漿:從抗-HIV、HIV-1RNA檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，其余項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果呈陰性的獻(xiàn)血者全血標(biāo)本中分離的
4、血漿，經(jīng)HIV-1RNA定量檢測(cè)，HIV-1濃度為1.08×105IU/ml。3)試劑:NAT聯(lián)檢和鑒別檢測(cè)分別采用，NAT定量檢測(cè)采用COBASAmpliPrep/COBASTaqManHCVTest試劑(批號(hào):N11304，，血清學(xué)檢測(cè)所用試劑均為血液中心常規(guī)檢測(cè)試劑。4)檢測(cè)設(shè)備:NAT聯(lián)檢和鑒別檢測(cè)采用ProcleixTigris系統(tǒng)，NAT定量檢測(cè)采用RocheCAP/CTM系統(tǒng)。???1.2標(biāo)本保存溫度、離心前保存時(shí)間及采血管對(duì)NAT聯(lián)檢試驗(yàn)結(jié)果的影響將血清學(xué)和NAT檢測(cè)結(jié)果均呈陰性的全血標(biāo)本，以每
5、6份標(biāo)本混為1份的原則進(jìn)行混勻;向混勻后的標(biāo)本中加入已知濃度的HBV或HCV或HIV-1陽(yáng)性血漿，使HBV或HCV或HIV-1的終濃度分別為50IU/ml、60IU/ml和150IU/ml;混勻后的全血標(biāo)本分別分裝至采血管A、B、C中，形成3組試驗(yàn)標(biāo)本，分別標(biāo)記為A組、B組和C組。然后每組標(biāo)本再分為2個(gè)亞組，分別置于4℃和30℃保存;于0h(陽(yáng)性對(duì)照)、4、6、8、10、12、24h分別取一定數(shù)量的標(biāo)本，在1000g條件下離心10min，之后在原溫度下繼續(xù)保存;在25h進(jìn)行NAT聯(lián)檢檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)分析檢測(cè)結(jié)果。??
6、?1.3標(biāo)本保存時(shí)間、采血管對(duì)NAT鑒別試驗(yàn)結(jié)果的影響按照1.2所示方法將制備好HBV(50IU/ml)、HCV(60IU/ml)或HIV-1(150IU/ml)的弱陽(yáng)性全血標(biāo)本混勻后分裝至A、B、C3種真空采血管中，形成3組試驗(yàn)標(biāo)本。再將不同組、不同病毒種類的標(biāo)本分為7個(gè)小組，全部標(biāo)本在1000g條件下離心10min后在4℃保存。依次于0d(陽(yáng)性對(duì)照)、1、2、3、4、5、6、7d的同一時(shí)間取1組標(biāo)本進(jìn)行NAT鑒別檢測(cè)。分析統(tǒng)計(jì)不同保存時(shí)間對(duì)HBV或HCV或HIV-1弱陽(yáng)性標(biāo)本NAT鑒別試驗(yàn)結(jié)果的影響。???
7、1.4保存時(shí)間對(duì)HCV陽(yáng)性標(biāo)本NAT定量結(jié)果的影響選取9份檢測(cè)結(jié)果呈抗-HCV、HCVRNA陽(yáng)性，HBsAg、抗-HIV、HBVDNA、HIV-1RNA陰性的獻(xiàn)血者全血標(biāo)本，使用血清學(xué)及NAT檢測(cè)結(jié)果均呈陰性的血漿分別進(jìn)行稀釋，使其成為HCV含量在1.04×102IU/ml～4.86×103IU/ml之間的弱陽(yáng)性標(biāo)本。再將每個(gè)弱陽(yáng)性標(biāo)本等量分成8份放置于真空采血管A中。全部標(biāo)本在1000g條件下離心10min后，4℃保存。依次于0、1、2、3、4、5、6、7d的同一時(shí)間取1組標(biāo)本進(jìn)行定量HCVRNA檢測(cè)。分析研
8、究4℃保存條件下保存時(shí)間對(duì)血漿中HCVRNA濃度的影響。???1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法標(biāo)本保存溫度、標(biāo)本離心前保存時(shí)間及采血管對(duì)NAT聯(lián)檢試驗(yàn)結(jié)果影響的研究、及標(biāo)本保存時(shí)間對(duì)NAT鑒別試驗(yàn)結(jié)果影響的研究均采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析;保存時(shí)間對(duì)HCV陽(yáng)性標(biāo)本定量結(jié)果影響的研究采用SPSS17.0軟件進(jìn)行重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析。P＜0.05和＜0.01，認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。???2結(jié)果?
