生物技術制藥復習重點microsoft word 文檔

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1、第一章生物技術：（Biotechnology）是人類對生物資源（包括微生物、植物、動物）的利用、改造并為人類服務的技術。生物技術制藥：就是利用基因工程技術、細胞工程技術、微生物工程技術、酶工程技術、蛋白質工程技術、分子生物學技術等來研究和開發(fā)藥物，用來診斷、治療和預防疾病的發(fā)生。第二章基因工程技術：基因工程技術又叫基因拼接技術或DNA重組技術。將重組對象的目的基因插入載體，拼接后轉入新的宿主細胞，構建成工程菌；實現(xiàn)遺傳物質的重新組合，并使目的基因在工程菌內進行復制和表達的技術。補料分批培養(yǎng)：補料分批培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應器中進行培養(yǎng)，經(jīng)過一段時間，間歇或連續(xù)地補加新鮮培養(yǎng)基，使

2、菌體進一步生長的培養(yǎng)方法。連續(xù)培養(yǎng)：連續(xù)培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應器中，攪拌培養(yǎng)至菌體濃度達到一定程度后，開動進料和出料蠕動泵，以一定稀釋率進行不間斷培養(yǎng)。透析培養(yǎng)技術：透析培養(yǎng)技術是利用膜的半透性原理使培養(yǎng)物和培養(yǎng)基分離，其主要目的是通過去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來解除其對生產(chǎn)菌的不利影響。高密度發(fā)酵：是指培養(yǎng)液中菌體的濃度在50gDCW/L以上，目的是降低成本，提高效率。離子交換層析：是依據(jù)流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。疏水層析：是利用蛋白質表面的疏水區(qū)域和固定相上疏水基團之間的相互作用力差異，對蛋白組分進行分離的層析

3、方法。親和層析：是利用固定化配體與目的蛋白質之間非常特異的生物親和力進行吸附，這種結合既是特異的，又是可逆的，改變條件可以使結合解除。凝膠過濾層析：是以多孔性凝膠填料為固定相，按分子大小對溶液中各組分進行分離的液相層析方法。利用基因工程技術生產(chǎn)藥物的優(yōu)點？答：1大量生產(chǎn)過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽，為臨床使用提供有效的保障；2、可以提供足夠數(shù)量的生理活性物質，以便對其生理、生化和結構進行深入的研究，從而擴大這些物質的應用范圍；3、可以發(fā)現(xiàn)、挖掘更多的內源性生理活性物質；4、內源生理活性物質在作為藥物使用時存在的不足之處，可通過基因工程和蛋白質工程進行改造和去除；5、可獲得新型

4、化合物，擴大藥物篩選來源?；蚬こ趟幬镏圃斓闹饕襟E？答：目的基因的克隆；構建DNA重組體；將DNA重組體轉移入宿主菌構建工程菌；工程菌的發(fā)酵；外源基因表達產(chǎn)物的分離純化；產(chǎn)品的檢驗等?；瘜W合成目的基因的先決條件？答：較小的蛋白質或多肽的編碼基因可以采用人工化學合成，其先決條件：已知目的基因的核苷酸序列或蛋白質的氨基酸序列，按相應的密碼子推導出DNA的堿基序列。人工合成基因的限制有哪些？答：1、不能合成太長的基因，50~60個堿基對；2、人工合成堿基對時，遺傳密碼的簡并會為選擇密碼帶來很大的困難：3、費用高。10基因工程宿主菌應滿足那些要求？目前應用最廣泛的宿主菌有哪些？答：1、

5、容易獲得較高濃度的細胞；2能利用廉價易得的原料；3、不致病、不產(chǎn)生內毒素；4、發(fā)熱量低，需氧低，適當?shù)陌l(fā)酵溫度和細胞形態(tài)；5、容易進行代謝調控；6、容易進行DNA重組技術操作；7、產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高，產(chǎn)物容易提取。宿主菌可分兩大類：1、原核細胞：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、鏈霉菌；2、真核細胞：酵母菌、絲狀真菌、哺乳動物細胞。表達載體須具備哪些條件？常用載體有哪些？答：1、能夠在宿主細胞中復制并穩(wěn)定地保存。2、具多個限制酶切點，但每種切口最好只有1個，以便與外源基因連接。3、具有某些標記基因，便于進行篩選。4、所產(chǎn)生的mRNA必須有翻譯的起始信號。5、具有很強的啟動子。6、有很強的終

6、止子。常用載體有：1、細菌細胞的質粒。2、λ噬菌體載體。真核基因在大腸桿菌中的表達形式？答：有三種形式：(1)融合蛋白的表達形式。（由一段短的原核多肽和真核蛋白結合在一起的蛋白質,稱為融合蛋白.。）(2)非融合蛋白的表達形式。(3)分泌型表達形式。表達用的酵母菌應滿足哪些條件？答：表達用的酵母宿主菌應具備①菌體生長力強.②菌體內蛋白酶要較弱.③菌株性能穩(wěn)定.④分泌能力強。基因工程菌在發(fā)酵過程中對發(fā)酵罐有哪些要求？答：①要提供菌體生長的最適宜條件；②培養(yǎng)過程不得污染，保證純菌培養(yǎng)；③培養(yǎng)及消毒過程中不得游離出異物；④不能干擾細菌代謝活動。離子交換層析的原理？答：：當離子交換劑處于水

7、溶液中時，活性離子可以從活性基因上解離下來，在基質骨架與溶液間自由遷移，并可與溶液間的同性離子，因與活性基因的化學親和力不同而發(fā)生交換，即發(fā)生離子交換作用。疏水層析的基本原理？答：蛋白質表面多由親水基團組成，也有一些疏水性較強的疏水區(qū)。在高鹽濃度時，蛋白質表面疏水部位的水化層被破壞，暴露出疏水部位，疏水作用增強，與固定相上的疏水基團產(chǎn)生疏水性作用而被吸附；鹽濃度降低時蛋白質疏水作用減弱，目的蛋白質被逐步洗脫下來。親和層析的基本原理？答：通過將具有親和力的兩個分子中一個固定在不溶性