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1、第一節(jié)實驗室結構、儀器設備及操作技術第二節(jié)培養(yǎng)基的組成、配制與滅菌第三節(jié)植物離體培養(yǎng)體系的建立本章內容一、植物組織培養(yǎng)實驗室的結構及設計要求：準備室;無菌操作室;培養(yǎng)室;溫室；細胞學實驗室第一節(jié)實驗室結構、儀器設備及操作技術（一）準備室：1.主要功能：用于培養(yǎng)器皿的清洗、培養(yǎng)基的配制、分裝和滅菌、試管苗的出瓶及整理等工作。2.主要儀器設備及用品：冰箱、天平、高壓滅菌鍋、pH計、干燥箱、實驗臺、水槽、涼干架、藥品柜、離心機、水浴鍋、微波爐、電爐、磁力攪拌器、蠕動泵、移液器、各種玻璃器皿（燒杯、量筒、容量瓶、試劑瓶、三角
2、瓶等）及培養(yǎng)基分裝用品等。百分之一天平千分之一天平萬分之一天平各種型號的高壓滅菌鍋移液器（二）接種室（無菌操作室）：1、功能：植物材料的滅菌、接種以及培養(yǎng)物的繼代轉接等。接種室要求保持潔凈，與化學實驗室之間應設置緩沖室。2、儀器設備及用品：超凈工作臺、紫外燈、小推車、擱架、磁盤、接種工具（各種鑷子、解剖刀、手術剪、普通剪刀接種針、酒精燈、手持噴霧器、細菌過濾器等）等。超凈工作臺（三）培養(yǎng)室：1、功能：主要用于植物材料的培養(yǎng)。要求室內潔凈并能保持一定的溫度、光照以及濕度以適合植物材料的生長和分化。2、儀器設備及用品：培
3、養(yǎng)架及燈管、搖床（振蕩器）、空調、自動定時器、加濕及除濕器、光照培養(yǎng)箱、溫濕度計等。培養(yǎng)架光照培養(yǎng)箱恒溫振蕩器多用振蕩器（四）細胞學實驗室：1、功能：主要用于培養(yǎng)材料的顯微觀察及照相等。2、儀式設備及用品：體視顯微鏡、普通顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、配套顯微照相裝置、普通相機或數(shù)碼相機、切片機及配套制片及染色用品等。體視顯微鏡普通光學顯微鏡倒置顯微鏡倒置熒光顯微鏡二、實驗室基本操作：（一）洗滌：1、普通器皿：采用洗衣粉、洗潔精等中性洗滌劑洗滌。2、難清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重鉻酸鉀洗液浸泡，最后清水沖洗
4、，或用超聲波儀清洗。（二）滅菌：1、器具滅菌：培養(yǎng)皿、解剖刀、鑷子等用品。（1）干熱滅菌：鋁箔包好后，放于恒溫干燥箱內，150℃保溫2小時，成本較高。（2）高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋內120℃15-20min。（3）灼燒滅菌：接種時，解剖刀及鑷子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精燈火焰上灼燒殺菌。2、培養(yǎng)基滅菌：采用高壓蒸汽滅菌，120℃15－20min。培養(yǎng)基體積越大，滅菌時間越長。3、不耐高溫化合物：采用過濾滅菌，如IAA等。4、外植體的表面滅菌：采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效氯1％的次氯酸鈉（5-3
5、0分鐘）、0.1－0.2%的氯化汞（2-15分鐘）等。殺菌劑中加入幾滴吐溫－20或80（Tween－20或80）效果較好。（三）無菌操作：1、保持接種室的無污染環(huán)境，定期熏蒸或噴霧處理，進行消毒。接種前打開超凈工作臺及紫外燈照射20-30min，關閉紫外等燈后使氣體散出后開始操作。2、保持超凈工作臺的潔凈：接種前用70％乙醇擦拭臺面或用噴壺噴霧，操作前，將手和手臂用70％乙醇消毒，所需試驗用品用乙醇擦拭后放入超凈工作臺。3、點燃酒精燈，進行操作，接種材料前后，灼燒瓶口，工具要灼燒徹底，防止交叉污染。4、保持接種室的潔
6、凈，發(fā)現(xiàn)污染及時挑出，并在滅菌后清洗，以減少污染源。5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接種室換拖鞋以保持接種室的潔凈。第二節(jié)培養(yǎng)基的組成、配制與滅菌一、培養(yǎng)基的組成和作用培養(yǎng)基（medium）是植物組織培養(yǎng)的重要材料，是外植體生長的營養(yǎng)物質，只有配制出適宜的培養(yǎng)基，才能使組織培養(yǎng)獲得成功。通常植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基包括以下六大類成分，即礦質營養(yǎng)、有機成分、植物生長調節(jié)劑、碳源、瓊脂以及其他附加物等。培養(yǎng)基的主要指標是營養(yǎng)成分及植物生長調節(jié)物質的濃度。培養(yǎng)基成分水植物激素碳源有機物（維生素、肌醇、氨基酸）培養(yǎng)體支
7、持材料輔助性物質無機鹽（大量元素、微量元素、鐵鹽）碳源碳源主要為細胞提供合成新化合物的骨架，為細胞的呼吸代謝提供底物與能源，此外還能維持一定的滲透壓。常用的碳源主要是蔗糖，使用濃度在10-50g/L，此外果糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等也常用于植物組織培養(yǎng)。但在胚培養(yǎng)時采用40-150g/L的高濃度，因蔗糖對胚狀體的發(fā)育起重要作用糖濃度高低直接影響形態(tài)建成。無機鹽元素名稱添加形式NKNO3,NH4NO3大量PKH2PO4NaH2PO4元素KKClKNO3(≥0.5mmol/L)CaCaCl2·2H2
8、OMgMg2SO4·7H2OSMg2SO4·7H2OFeFeNa2-EDTA微量BH3BO3元素MnMnSO4(≤0.5mmol/L)CuCuSO4MoNa2MoO4·2H2OClCaCl2·2H2O種類：VB1（鹽酸硫胺素）、VB6（鹽酸吡哆醇）、Vpp（煙酸）、Vc(抗壞血酸）濃度：0.1-1.0mg/L作用：VB1促愈傷組織產(chǎn)生，提高活力
