實驗五血清尿素氮的測定.doc

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1、血清尿素氮的測定一.實驗原理血清中尿素在氨基硫脲存在下，與二乙酰一肟在強酸溶液中共煮時，可生成雙乙酰和尿素形成的紅色復(fù)合物(二嗪衍生物)，其顏色深淺與尿素含量成正比，與同樣處理的尿素標(biāo)準(zhǔn)液比色。即可求得血清中尿素的含量。由于反應(yīng)在強酸中進行，所產(chǎn)生的羥胺是干撓物質(zhì)，所以必須用氧化劑將其氧化除去。在呈色反應(yīng)中產(chǎn)生的有色復(fù)合物對光不穩(wěn)定．加入氨基硫脲可增加其穩(wěn)定性，還可提高尿素與雙乙酰反應(yīng)的靈敏度。二.實驗操作取試管3支，注明空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，按下表操作管試號劑測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清(ml)0.02————尿素氮標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(ml)——0.0

2、2——蒸餾水(ml)————0.02二乙酰一肟試劑(ml)0.50.50.5尿素氮試劑(ml)5.05.05.0混勻后置沸水浴中煮沸12分鐘，取出在冷水中冷卻5分鐘，分光光度計波長540nm比色，以空白管調(diào)零，測定各管吸光度值。三.計算正常值參考范圍3．57～14．28mmol／L四.臨床意義血液中非蛋白含氮化合物包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、膽紅素及氨等。其中尿素含量約占l／3～1／2。尿素是蛋白質(zhì)代謝的產(chǎn)物．通過腎臟排出，故測血清尿素氮可作為檢測腎臟功能的試驗，并且其增高程度與病變的嚴(yán)重程度呈平行關(guān)系。五.試劑1.尿素氮試劑：蒸餾水lOOm

3、l，濃硫酸44ml，85％磷酸66ml，冷卻至室溫后，加氨基硫脲50mg，硫酸鎘(3CdSO４·8H2O)2g，溶解后稀釋至1000ml。2.20g／L二乙酰一肟試劑：稱取二乙酰一肟20g，加入蒸餾水約900ml，溶解后稀釋至1000ml.３.尿素氮標(biāo)準(zhǔn)貯存液(357mmol／L)：稱取尿素1.072g溶解于蒸餾水中定容至1000ml。４.尿素氮標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(17.85mmol／L)；取貯存液5ml，加蒸餾水至100ml。