試驗一紅細胞計數(shù)試驗目的掌握紅細胞計數(shù)原理及技術二.doc

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1、實驗一紅細胞計數(shù)一、實驗目的：掌握紅細胞計數(shù)原理及技術。二、實驗原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，充入計數(shù)池中，于顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細胞數(shù)，經(jīng)過換算示得每升血液內(nèi)的紅細胞數(shù)。三、實驗器材及試劑：顯微鏡、血紅蛋白吸管、計數(shù)板、蓋玻片、生理鹽水。四、實驗操作：1、取試管1支，加稀釋液3.98ml或1.99ml。2、用清潔干燥的微量吸管準確吸取末梢血10微升。3、擦去管尖外部余血、輕輕注入紅細胞稀釋液底部，再吸取上層稀釋液清洗吸管2-3次，立即搖勻。4、將計數(shù)池與蓋玻片用軟布料擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上。5、用吸管吸取混勻的紅細胞懸液，充入計數(shù)池中。6、

2、靜止2-3分鐘，待經(jīng)紅細胞下沉后，用高倍鏡或低倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)四角和正中五個中方格內(nèi)的紅細胞數(shù)。五、計算N(五個中方格內(nèi)RBC數(shù))×5×10×106×200=N×1012個/升×5：表示5個中方格內(nèi)RBC數(shù)換算為1個大方格內(nèi)RBC數(shù)×10：1個大方格容積、0.1ul、換算為1ul內(nèi)RBC數(shù)×106：1ul換算為1升內(nèi)紅細胞數(shù)×200：稀釋倍數(shù)六、正常參考值正常參考值：成年男性：4.00-5.50×1012/升成年女性：3.50-5.00×1012/升新生兒：6.00-7.00×1012/升實驗二血紅蛋白測定一、實驗目的：掌握氰化高鐵血紅蛋白比色法原理及技術。

3、二、實驗原理：血液在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中溶血后，除SHb外各種血紅蛋白可被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再與CNˉ結合生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋（HicN）。HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的條件下，毫摩爾消光系數(shù)為44L.mmol-1.cm-1，因此根據(jù)標本的吸光度，即求得血紅蛋白濃度。三、實驗操作：1、取指血20ul，加到5ml血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中，混勻，靜止5分鐘。2、用分光光度計比色，波長540nm，以蒸餾水或空白轉(zhuǎn)化液調(diào)零，測定吸光度。3、用血紅蛋白濃度為50g/L、100g/L、150g/L、200g/L在721型分光光度計上

4、測定吸光度分別為0.13，0.27，0.405，0.54.四、計算:血紅蛋白（g/L）=測定管吸光度×367.7正常參考值：成年男性：120-160g/L成年女性：110-150g/L新生兒：170-220g/L實驗三白細胞計數(shù)一、實驗目的：掌握白細胞計數(shù)顯微鏡計數(shù)法原理及技術。二、實驗原理：用稀醋酸液將血液稀釋并破壞紅細胞，混勻后充入計數(shù)池中，于顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細胞數(shù)，經(jīng)過換算求得每升血液內(nèi)的白細胞數(shù)。三、實驗器材及試劑：顯微鏡、微量吸管、計數(shù)板、蓋玻片、白細胞稀釋液。四、實驗操作：1、取試管1支，加白細胞稀釋液0.38ml。2、用清潔干燥的微量吸管

5、準確吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。3、擦去管尖外部余血、輕輕注入稀釋液底部，再吸取上清液清洗3次，搖勻。4、將計數(shù)板與蓋玻片用軟布擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上，再用微量吸管吸取懸液，充入計數(shù)池與蓋玻片間的細縫隙中，靜止2-3分鐘，待白細胞下沉。5、用低倍鏡計數(shù)四角的四個大方格內(nèi)的白細胞數(shù)。五、計算(四個大方格內(nèi)WBC數(shù)/4)×10×20×106=WBC數(shù)/升六、正常參考值正常參考值：成人：（4-10）×109/升新生兒：（15-20）×109/升6月-2歲：（11-12）×109/升實驗四白細胞分類計數(shù)一、實驗目的：掌握白細胞分類計數(shù)、原理及技術。二、實驗

6、原理：把血液制成細胞分布均勻的薄膜涂片，經(jīng)wright染色后，顯微鏡下觀察，根據(jù)白細胞形態(tài)特點逐個分類計數(shù)。得出各種白細胞的相對比值，并注意觀察其形態(tài)和質(zhì)量的變化。三、實驗器材及試劑：顯微鏡、染色缸和架，載玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。四、實驗操作：1、取末梢血1滴。置于載玻片的一端，以邊緣平滑的推片制成血涂片，空氣干燥。2、用蠟筆在血膜兩端劃線，以防染液溢出，然后將血片放于染色架上。3、先加瑞氏染液數(shù)滴，使其覆蓋整個血膜，固定染色細胞0.5-1分鐘。4、按1：1或1：2加緩沖液與染料混勻，染色10分鐘左右。5、在血膜染10分鐘后，用緩沖液或接近中性的水沖去洗

7、液，待自然干燥或濾紙吸干后，用鏡油觀察。五、計數(shù)方法：1、先用低倍鏡觀察血片染色情況，白細胞多少和細胞分布情況。2、選擇血涂片的體尾交界處，染色良好的區(qū)域，在油鏡下計數(shù)100-200個白細胞，按其形態(tài)特征進行分類計數(shù)，求出各自白細胞所占數(shù)值（百分率）。3、白細胞分類計數(shù)方法很多，常用的有，完全記錄法、半記錄法、分類計數(shù)器計數(shù)法。4、每個病人應分類白細胞數(shù)，視白細胞總數(shù)多少而定。5、各類細胞所占的百分率乘以白細胞總數(shù)/升，既得每升血液中各類白細胞的濃度。實驗五血小板計數(shù)一、實驗目的：掌握血小板計數(shù)原理及技術。二、實驗原理：尿素液能溶解紅細胞及白細胞而保存完整形態(tài)的

8、血小板，經(jīng)稀釋后在血細胞