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1、高效液相色譜法HPLC付亞平WhatdoesHPLCmean?HighPerformanceLiquidChromatographyHighPressureLiquidChromatographyHighPricedLiquidChromatographyHighPatienceLiquidChromatography一概述1、歷史2、特點3、方法局限性4、與氣相色譜比較5、與經(jīng)典LC比較6、色譜學文獻1、歷史1903年色譜法問世1931年庫恩（Kuhn）分離胡蘿卜素1941年馬丁（Martin）和辛格（Synge）
2、提出液液分配色譜法1958年美國生物化學家斯坦因(W.H.Stein)和莫爾（Moore）研制出氨基酸分析儀60年代末，70年代初，高效液相色譜儀的成功研制他們的主要貢獻☆首次提出分離過程的理論/數(shù)學處理----塔板理論，這是在色譜柱操作參數(shù)基礎上模擬蒸餾理論，以理論塔板來表示分離效率，定量地描述、評價分離過程；☆在色譜過程中最早引入分配平衡取代吸附平衡，即采用分配色譜進行分離。此外，將一種液體固定在適當?shù)妮d體上，使第二種液體流過前者而實現(xiàn)分離，也是一個很重要的成就?！钐岢隽松V法進一步發(fā)展最有遠見的預言：一是“流動
3、相可用氣體來代替，對分離更有好處”；二是“使用非常細顆粒的填料和柱兩端施加較大的壓差，應能得到最小的理論塔板”高效液相色譜儀的成功研制60年代末，由于生命科學發(fā)展需要，對一些高極性、大分子量、熱不穩(wěn)定和離子型化合物的分離也促使高效液相色譜的研究。 荷瓦斯（Horvath，1967）、哈伯（Huber，1967）、科克蘭（Kirkland，1969）三個研究小組分別報道高效液相色譜儀的研制主要貢獻☆高效填料：細顆粒、耐壓；特別是鍵合固定相研制☆高壓泵:高精密度流量、高壓和耐腐蝕流路通道（克服細填料帶來的流速慢的缺點，同
4、時加快了傳質(zhì)過程）☆儀器檢測：高靈敏度連續(xù)檢測高效液相色譜的重要特征一是由經(jīng)典“開放柱液相色譜”向“密閉柱液相色譜”方向發(fā)展，實現(xiàn)了分離分析一體化；二是色譜柱的“現(xiàn)代化”，即采用小顆粒高效固定相和高壓泵輸送流動相，強化了兩相的傳質(zhì)，實現(xiàn)了高效快速分離。HPLC是整個70～90年代分析化學發(fā)展最為迅速的一個分支，部分地滿足了迅猛發(fā)展的生命科學的需要。由于HPLC分離分析的高靈敏度、定量的準確性HPLC應用范圍廣，適于非揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定組分的分析對被測物質(zhì)活性影響小，因此，在工業(yè)、科學研究，尤其是在生物學和醫(yī)學等方面應用
5、極為廣泛。如氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、烴、碳水化合物、藥品、多糖、高聚物、農(nóng)藥、抗生素、膽固醇、金屬有機物等分析，大多是通過HPLC來完成的。NumberofmentionsofHPLCinChemicalAbstracts2．特點高效：柱效可達10萬理論塔板數(shù)高選擇性：高柱效且流動相參入分離高靈敏度：檢測器有較高的靈敏度快速分析：高壓泵的使用加快分析速度3．方法的局限性1.HPLC使用多種溶劑作為流動相，當進行分析時所需成本高于GC，且易引起環(huán)境污染。梯度洗脫時比GC程序升溫操作復雜。2.HPLC缺少GC使用的高靈敏度
6、的通用檢測器（如熱導檢測器，氫火焰離子化檢測器。3.HPLC不能代替GC去完成要求柱效超過10萬塊理論塔板數(shù)以上的分析，如用毛細管氣相色譜法分析組成復雜具有多種沸程的石油產(chǎn)品4.HPLC也不能代替中低壓柱色譜法，去分析受壓易分解變性的具有生物活性的生化樣品。4．與氣相色譜比較項目GCHPLC流動相有限幾種氣體,僅起運載樣品的作用，一般不參與分離可選擇多種液體，參與分離適用樣品在實驗柱溫下,具有足夠的揮發(fā)度,且熱穩(wěn)定的物質(zhì)。只要用合適的溶劑溶解的物質(zhì)，無論哪種都可成為液相色譜的分析對象柱溫樣品氣化溫度一般在室溫制備難易
7、檢測能力強相對較弱成本低高相同點：理論、儀器化自動化5、色譜學文獻Snyder,L.R.;Kirkland,J.J.,IntroductiontoModernLiquidChromatography2nded.,Wiley-Interscience,N.Y.1979JournalofChromatographyJournalofChromatogrphicScienceChromatographiaJournalofLiquidChromatographyLCMagazine色譜相關的色譜網(wǎng)站A國內(nèi)色譜網(wǎng)站中國色譜網(wǎng)
8、(www.sepu.net)(www.chrhome.com)中國分析儀器網(wǎng)(www.54pc.com)儀器信息網(wǎng)(http://www.instrument.com.cn)蘭州化物所研究中心色譜論壇http://www.anatechweb.com/bbs/default.asp大連依利特分析儀器有限公司在線論壇http://www.elit
