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《酶提取桑葚渣中花色苷的提取.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、桑葚渣中花色苷的提取摘要：以提高花色苷的提取率為目的。探索果膠酶提取桑葚渣中花色苷的工藝條件?？疾煊绊懱崛⌒Ч闹饕蛩兀好赣昧浚附鈺r(shí)間，酶解溫度，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化桑葚花色苷提取工藝。1.材料與方法1.1材料釀桑葚酒后的桑葚渣1.2主要儀器紫外可見光光度計(jì)TU-1800PC電熱恒溫振蕩水槽DKZ-2電子分析天平BS-210S高速組織攪碎機(jī)DS-1電子PH計(jì)PP-15超濾裝置納濾裝置1.3主要試劑果膠酶30000U/g檸檬酸分析純磷酸氫二鈉分析純鹽酸分析純無(wú)水乙醇分析純1.4試驗(yàn)設(shè)
2、計(jì)1.4.1提取液的配制磷酸緩沖液的配制；配制0.1mol/L的檸檬酸溶液；配制0.2mol/L的磷酸氫二鈉溶液；0.1mol/L的檸檬酸溶液398ml，加入0.2mol/L的磷酸氫二鈉溶液102ml。稀釋1000ml。2.桑葚中花色苷提取2.1用果膠酶酶解桑葚渣稱取10g的桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入一定量的去氧水，加入酶進(jìn)行酶解。2.2粗提取花色苷（1）將上述各酶解后的溶液進(jìn)行滅酶處理，（2）過濾提取上清液。（3）在提取液中加入聚合硫酸鐵，并進(jìn)行過濾，除去絮凝沉淀物，得初級(jí)濾液（4）用石油醚對(duì)初級(jí)
3、濾液萃取3次除去脂類（1）最后再真空抽濾，保證提取液無(wú)顆粒雜質(zhì)。最終得到桑葚花苷素粗提取液。2.3純化花色苷（1）用大孔樹脂對(duì)粗提取液進(jìn)行吸附，然后采用45%的乙醇水溶液對(duì)已經(jīng)吸附在大孔樹脂上的花色苷有效成分進(jìn)行洗脫，得洗脫液；（2）采用納濾裝置對(duì)（1）所得洗脫液進(jìn)行過濾處理，得到透過液和截留液，實(shí)現(xiàn)對(duì)所需溶液和洗脫溶劑的分離；（3）將所需溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后裝入培養(yǎng)皿中,冷藏于-80℃冰箱冷凍2ｈ后放入冷凍干燥機(jī)凍成干粉。（4）所得干粉即為純化后的花色苷2.4稱量干粉的重量3.花色苷理論測(cè)定指標(biāo)花色苷含量
4、：采用消光系數(shù)法計(jì)算花色苷含量，用分光光度計(jì)，于1cm比色皿中，波長(zhǎng)為530nm處測(cè)定吸光度。消光系數(shù)法：用9mL酸化乙醇（95%乙醇和1.5N鹽酸，體積比85：15）于1cm比色皿中，在波長(zhǎng)為530處測(cè)定吸光值?？偦ㄉ蘸坑?jì)算公式如下：總花色苷含量式中：E-530nm處直接測(cè)定的吸光度值（)V-萃取液測(cè)定時(shí)稀釋的總體積數(shù)（mL)M-樣品重量（g)98.2-1%de1花色苷1mol消光系數(shù)4.桑葚渣中花色苷酶提取法單因素實(shí)驗(yàn)4.1.1果膠酶用量對(duì)花色苷提取量的影響稱取10g桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加
5、入9ml磷酸緩沖溶液，在溫度50℃，PH3.0，酶解時(shí)間1h條件下，酶用量分別為0，3，6，9，12和15mg/g果渣酶解后，移取上清液1ml，測(cè)定花色苷含量。果膠酶（mg/g）03691215花色苷提取率畫出折線圖：由圖可知：4.1.2果膠酶酶解PH對(duì)花色苷提取率的影響稱取10g桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入9ml磷酸緩沖溶液，酶用量40mg/g果渣，酶解時(shí)間1.5h，溫度50℃。分別在PH為2，3，4，5，6，7的條件下進(jìn)行酶解，移取上清液1ml，測(cè)定花色苷含量。PH234567花色苷提取率畫出折線
6、圖：由圖可知：4.1.3果膠酶酶解溫度對(duì)花色苷提取率的影響稱取10g桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入9ml磷酸緩沖溶液，酶用量40mg/g果渣，酶解時(shí)間1.5h，PH3.0，分別在溫度為20℃，30℃，40℃，50℃，60℃和70℃的條件下進(jìn)行酶解后，移取上清液1ml，測(cè)定花色苷含量。酶解溫度/℃203040506070花色苷提取率畫出折線圖：由圖可知：4.1.4果膠酶酶解時(shí)間對(duì)花色苷提取率的影響稱取10g桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入9ml磷酸緩沖溶液，酶用量40mg/g果渣，在溫度50℃，PH3.0，酶
7、解0，0.5，1，1.5，2和2.5h后，移取上清液1ml，測(cè)定花色苷含量。酶解時(shí)間/h00.511.52.02.5花色苷提取率畫出折線圖：由圖可知：4.2花色苷酶法提取的條件優(yōu)化根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果。以酶用量，酶解時(shí)間，酶解溫度為考察因素，按正交法對(duì)酶法提取工藝進(jìn)行研究，優(yōu)化花色苷酶法提取的最佳工藝條件。4.2.1正交實(shí)驗(yàn)提取花色苷選用4因素3水平正交設(shè)計(jì)法,見下表水平因素果膠酶用量PH提取溫度/℃提取時(shí)間/h133401264501.5395602正交表實(shí)驗(yàn)號(hào)果膠酶用量PH提取溫度提取時(shí)間收率111
8、112122231333421225223362311731338322293311Σ1Σ2Σ3K1K2K3R由圖可知：5.結(jié)論
