資源描述：
《乳酸菌檢測國標(biāo)方法.docx》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、乳酸菌檢測方法1適用范圍本方法適用于清谷田園食品有限公司系列產(chǎn)品及原料中的乳酸菌的檢測。2設(shè)備和儀器?2.1恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃2.2天平：感量為0.01g2.3無菌吸管：1ml、2ml、10ml2.4無菌錐形瓶：500ml2.5無菌培養(yǎng)皿：直徑為90mm2.6無菌試管：18×180mm2.9酒精燈2.10立式蒸汽壓力滅菌器2.11超凈工作臺2.12厭氧缸3試劑?3.1無菌生理鹽水：稱取8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。3.2MRS（ManRogosaSharpe）培養(yǎng)基3.2.1成分蛋白胨10.0g牛肉粉5.0g酵母粉
2、4.0g葡萄糖20.0g吐溫801.0mLK2HPO4.7H2O2.0g醋酸鈉.3H2O5.0g檸檬酸三銨2.0gMnSO4.7H2O0.2gMnSO4.4H2O0.05g瓊脂粉15g3.2.2制法：將上述成分加于1000mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)PH至6.2±0.2，加熱煮沸溶解，分裝于錐形瓶中，在121℃高壓滅菌15-20min。3.3莫匹羅星鋰鹽（Li-Mupirocin）和半胱氨酸鹽酸鹽改良MRS培養(yǎng)基：3.3.1??莫匹羅星鋰鹽儲備液制備：稱取50mg莫匹羅星鋰鹽加入到50mL蒸餾水中，用0.22?mm微孔濾膜過濾除菌。3.3.2??半胱氨酸鹽酸鹽儲備液
3、制備：稱取250mg莫匹羅星鋰鹽加入到50mL蒸餾水中，用0.22?mm微孔濾膜過濾除菌。3.3.3??制法將A.1.1?成分加入到950mL蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH，分裝后121?℃高壓滅菌15min～20min。臨用時加熱熔化瓊脂，在水浴中冷至48?℃，用帶有0.22?mm微孔濾膜的注射器將莫匹羅星鋰鹽儲備液及半胱氨酸鹽酸鹽儲備液制備加入到熔化瓊脂中，使培養(yǎng)基中莫匹羅星鋰鹽的濃度為50?mg/mL，半胱氨酸鹽酸鹽的濃度為500?mg/mL。3.4?MC培養(yǎng)基3.4.1??成分大豆蛋白胨??????????5.0g牛肉粉3.0g酵母粉3.0g葡萄糖2
4、0.0g乳糖????????????????????????20.0g碳酸鈣10.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000mL1％中性紅溶液5.0mL?3.4.2??制法將前面7種成分加入蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH至6.0±0.2，加入中性紅溶液。分裝后121?℃高壓滅菌15min～20min。4檢驗(yàn)程序乳酸菌檢驗(yàn)程序見圖1。5?操作步驟5.1樣品制備5.1.1?樣品的全部制備過程均應(yīng)遵循無菌操作程序。5.1.2?冷凍樣品可先使其在2?℃～5?℃條件下解凍，時間不超過18h，也可在溫度不超過45?℃的條件解凍，時間不超過15min。5.1.3?固體和半固體食品：
5、以無菌操作稱取25g樣品，置于裝有225mL生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，制成1:10樣品勻液；或置于225mL生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min制成1:10的樣品勻液。5.1.4?液體樣品：液體樣品應(yīng)先將其充分搖勻后以無菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分振搖，制成1:10的樣品勻液。5.2?步驟5.2.1?用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于裝有9mL生理鹽水的無菌試管中
6、（注意吸管尖端不要觸及稀釋液），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。5.2.2?另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭，按上述操作順序，做10倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋一次，即換用1次1mL滅菌吸管或吸頭。5.2.3?乳酸菌計數(shù)5.2.3.1?乳酸菌總數(shù)乳酸菌總數(shù)計數(shù)的培養(yǎng)條件的選擇和結(jié)果說明如表1所示表1乳酸菌總數(shù)計數(shù)的培養(yǎng)條件的選擇和結(jié)果說明樣品中所包括乳酸菌菌屬培養(yǎng)條件的選擇和結(jié)果說明僅包括雙歧桿菌屬按GB4789.34的規(guī)定執(zhí)行僅包括乳桿菌屬按照5.2.3.4操作。結(jié)果即為乳桿菌屬總數(shù)僅包括嗜熱鏈球菌按照5.2.3
7、.3操作。結(jié)果即為嗜熱鏈球菌總數(shù)同時包括雙歧桿菌屬和乳桿菌屬按照5.2.3.4操作。結(jié)果即為乳酸菌屬總數(shù)如需單獨(dú)計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目，按照5.2.3.2操作同時包括雙歧桿菌屬和嗜熱鏈球菌按照5.2.3.2和5.2.3.3操作，二者之和為乳酸菌總數(shù)如需單獨(dú)計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目，按照5.2.3.2操作同時包括乳桿菌屬和嗜熱鏈球菌按照5.2.3.3和5.2.3.4操作，二者之和為乳酸菌總數(shù)2）按照5.2.3.3操作。結(jié)果即為嗜熱鏈球菌總數(shù)3）按照5.2.3.4操作。結(jié)果即為乳酸菌屬總數(shù)同時包括雙歧桿菌屬、乳桿菌屬和嗜熱鏈球菌按照5.2.3.3和5.2.3.4操作，二
8、者之和為乳酸菌總數(shù)如需單獨(dú)計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目，按照5.2.3.2操
