血藥法測(cè)定小鼠口服給藥阿司匹林的動(dòng)力學(xué)參數(shù).doc

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1、實(shí)驗(yàn)名稱：血藥法測(cè)定小鼠口服給藥阿司匹林的動(dòng)力學(xué)參數(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆瞻⑺酒チ盅獦拥奶幚矸椒ㄕ莆昭帩舛?時(shí)間曲線的測(cè)定方法掌握血藥法測(cè)定藥物制劑動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法。了解并學(xué)習(xí)常用作圖軟件，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算軟件（DAS軟件）。實(shí)驗(yàn)試劑與儀器：昆明種小鼠80只，雌雄各半。阿司匹林泡騰片，眼科剪，眼科彎頭鑷，1.5mlEP管，5mlEP管，小鼠灌胃針，低溫高速離心機(jī)（12000轉(zhuǎn)），水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品，阿司匹林標(biāo)準(zhǔn)品、蒸餾水，渦旋儀，乙腈，冰醋酸，雙蒸水實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟：動(dòng)物分組：80只動(dòng)物隨機(jī)分為3組（1）單獨(dú)給予阿司匹

2、林200mg/kg26只（2）灌胃給予西咪替?。–YP3A4抑制劑）50mg/kg，45min后灌胃給予阿司匹林200mg/kg26只（3）灌胃給予西咪替丁（CYP3A4抑制劑）100mg/kg，45min后灌胃給予阿司匹林200mg/kg28只1.小鼠的口服給藥，摘眼球法采集血樣小鼠灌胃給予阿司匹林200mg/kg，分別于給藥前和給藥后10min、30min、1h、2h、4h、8h、16h不同時(shí)間點(diǎn)摘眼球采血，每個(gè)點(diǎn)3只平行采樣，血樣置于1.5mlEP管中，室溫靜止10min后，1200RPM離心10mi

3、n，吸取上層血清備用。(讓血液自由滴落，盡量不要沾壁，防止溶血)2.供試品制備精密量取血漿樣品150μl，加入乙腈850μl（作用為除去蛋白），渦旋振蕩5min，10000RPM離心8min，取上清液20μl進(jìn)高效液相色譜檢測(cè)。記錄色譜圖、阿司匹林原型藥物與其代謝產(chǎn)物水楊酸峰面積(As)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血漿中阿司匹林與水楊酸的濃度。3.液相色譜條件色譜柱：C18（4.6x150,5μm），流動(dòng)相：乙腈-5%冰醋酸水溶液（20:80），檢測(cè)波長(zhǎng)為303nm或275nm.4.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(1)水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線分

4、別取水楊酸40mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度，得到4.0mg/mL水楊酸的貯備液，用乙腈分別稀釋成不同濃度的系列溶液（4000、2000、800、200、80、20μg/mL）（母液）。取6支5mLEP管，分別加入0.15mL空白血漿，各支分別加入50μL水楊酸系列溶液，再加入乙腈1.8ml，渦旋振蕩5min，15000RPM離心8min，得工作液水楊酸濃度分別為0.5、2、5、20、50、100μg/ml。取上清液20μL用高效液相分析檢測(cè)。以As為縱坐標(biāo)，水楊酸濃度C(μg

5、/mL)為橫坐標(biāo)，直線回歸，求算標(biāo)準(zhǔn)方程及R值。(2)阿司匹林標(biāo)準(zhǔn)曲線分別取阿司匹林40mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度，得到4.0mg/mL阿司匹林的貯備液，用乙腈分別稀釋成不同濃度的系列溶液（4000、2000、800、200、80、20μg/mL）（母液）。取6支5mLEP管，分別加入150μL空白血漿，各支分別加入500μL阿司匹林系列溶液，再加入乙腈350μL，渦旋振蕩5min，15000RPM離心8min，得工作液阿司匹林濃度分別為10、40、100、400、1000

6、、2000μg/mL。取上清液20μL用高效液相分析檢測(cè)。以As為縱坐標(biāo)，阿司匹林濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)，直線回歸，求算標(biāo)準(zhǔn)方程及R值。5.血樣中藥物濃度測(cè)定及血藥濃度-時(shí)間曲線的繪制方法作圖:綜合各組動(dòng)物數(shù)據(jù)，每三個(gè)樣本合為一組，計(jì)算其平均值及SD，按照在坐標(biāo)紙上以血藥濃度-時(shí)間描點(diǎn)作圖。同時(shí)學(xué)習(xí)常用作圖軟件（eg.GraphPad），學(xué)習(xí)用軟件繪制時(shí)間-血藥濃度曲線。6.根據(jù)血藥濃度和動(dòng)力學(xué)公式計(jì)算相關(guān)動(dòng)力學(xué)參數(shù)用線性回歸法求出口服給藥后阿司匹林的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（Cmax,tmax,K,Ka,t1

7、/2,CL），同時(shí)計(jì)算AUC0-t與AUC0-∞（積分法或梯形法）。學(xué)習(xí)使用DAS軟件計(jì)算各藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。