溴甲酚綠法測定血清白蛋白.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)五溴甲酚綠法測定血清清蛋白一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆眨轰寮追泳G法測定血清清蛋白的基本原理和操作。熟悉：血清清蛋白測定的臨床意義。了解：溴甲酚綠法測定血清清蛋白的特點(diǎn)和注意事項(xiàng)。二、實(shí)驗(yàn)原理pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH

2、理清蛋白+BCG藍(lán)綠色復(fù)合物+-pH4.2Brij-35三、試劑與器材1.0.5mol/L琥珀酸緩沖貯存液2.10mmol/LBCG貯存液3.疊氮鈉貯存液4.聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）貯存液5.BCG試劑6.40g/L清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液7.分光光度計(jì)ddH2O400mL琥珀酸緩沖貯液100mLBCG貯液8.0mL疊氮鈉貯液2.5mL，Brij-35貯液2.5mL，ddH2O定容至1000mL。立刻混勻后，在波長630nm處用空白管調(diào)零，30s±3s內(nèi)讀取吸光度。加入物（mL）空白管（B）標(biāo)準(zhǔn)管測定管S1S2U1U2血清———0.020.02白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液—0.020.02—

3、—蒸留水0.02————BCG試劑4.04.04.04.04.0四、操作五、計(jì)算血清清蛋白(g/L)＝āu/ās×蛋白標(biāo)準(zhǔn)液濃度(g/L)=āu/ās×40(g/L)參考范圍：正常人:35－55g/L六、注意事項(xiàng)1.BCG是一種pH指示劑，變色域?yàn)閜H3.8（黃色）~5.4（藍(lán)綠色），因此控制反應(yīng)液的pH是本法測定的關(guān)鍵。2.時(shí)間必須控制準(zhǔn)確。因?yàn)锽CG不但與清蛋白呈色，而且與血清中多種蛋白質(zhì)成分呈色，其中以a1-球蛋白、運(yùn)鐵蛋白、結(jié)合珠蛋白更為顯著，其反應(yīng)速度較清蛋白稍慢。由于在30s內(nèi)呈色對(duì)清蛋白特異，故BCG與血清混合后，在30s內(nèi)讀數(shù)可明顯減少非特異性呈色反應(yīng)。七、

4、方法學(xué)評(píng)價(jià)1.本法操作簡便、快速，膽紅素、溶血和中度脂血癥無干擾，既可手工操作，也能自動(dòng)分析，是目前國內(nèi)測定血清清蛋白的最常用方法。2.本法線性范圍為10~60g/L，RCV<4%。但該法與溴甲酚綠紫法比較，對(duì)血清清蛋白特異性稍差，3.重復(fù)性差，清蛋白特異性稍差（極性氨基酸參與反應(yīng)，但參與運(yùn)輸?shù)那虻鞍滓矔?huì)與染料反應(yīng)，不過反應(yīng)速度較慢）。4.溴甲酚紫法：特異性較好，但不能與動(dòng)物血清反應(yīng)，而目前的質(zhì)控血清多為動(dòng)物血清，因此臨床應(yīng)用少。4.電泳法：可以將白蛋白、球蛋白等分開，并分別測定其含量，是種較好的方法，但過程相對(duì)復(fù)雜。八、臨床意義1.血清清蛋白：常見于嚴(yán)重脫水所致的血漿濃縮

5、。（比較少見）2.血清清蛋白:臨床比較重要和常見，常與總蛋白降低的原因大致相同。急性：多見于大出血和嚴(yán)重?zé)齻?。慢性：腎病蛋白尿、肝功能受損，腸道腫瘤及結(jié)核伴慢性出血、營養(yǎng)不良和惡性腫瘤。若低于20g/L，臨床上出現(xiàn)水腫。3.A/G比值：正常人A/G>1.0某些病人可同時(shí)出現(xiàn)清蛋白減少和球蛋白升高的現(xiàn)象，若A/G<1.0，稱為A/G比值倒置，常見于多發(fā)性骨髓瘤和聚球蛋白升高。4.先天性清蛋白缺乏癥：有文獻(xiàn)報(bào)道，因清蛋白合成障礙，血清中幾乎沒有清蛋白而導(dǎo)致清蛋白缺乏。