血清總蛋白及白蛋白測定.ppt

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1、血清總蛋白及白/球比值的測定實驗?zāi)康模?.混合物中某種物質(zhì)濃度的測定方法2.熟悉血清總蛋白和白蛋白的測定方法3.掌握血清總蛋白和白/球比值的臨床意義4.熟悉721分光光度計的使用生物化學(xué)實驗基本技能訓(xùn)練一、血清總蛋白的測定（雙縮脲法）二、血清白蛋白的測定（溴甲酚綠法）血清總蛋白的測定雙縮脲（）在堿性溶液中與銅離子作用生成穩(wěn)定的紫紅色配合物，蛋白質(zhì)與雙縮脲相似，分子中的肽鍵（—CO—NH—）也能與雙縮脲試劑形成紫色的配合物。這種配合物在540nm出有最大吸收峰。吸收度在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)的含量成正比。（凡分子內(nèi)含有兩個或兩個以上甲?；被ā狢ONH—），不

2、論是直接相連還是通過一個或原子間接相連，都可發(fā)生雙縮脲反應(yīng)）雙縮脲反應(yīng)示意圖實驗操作：取三支試管按下表加入式樣，混勻37攝氏度水浴放置十分鐘，以空白管調(diào)零，540nm波長測定吸光度血清總蛋白的測定項目測定管標準管空白管血清/ml1.00－－蛋白質(zhì)標準液/ml－1.00－理生鹽水/ml－－1.00雙縮脲試劑/ml5.005.005.00實驗試劑（1）生理鹽水（2）雙縮脲試劑（3）蛋白質(zhì)標準液（4）待測血清血清白蛋白的測定在pH=4.2環(huán)境中，帶正電荷的白蛋白（pI=4.9）可以與陰離子染料溴甲酚綠（BCG）結(jié)合，溶液由黃變藍。且顏色的深淺與白蛋白的濃度成正比

3、，此方法可以在不分離白蛋白的情況下直接測定血清白蛋白的含量。試劑中加入的非離子表面活性劑，可以提高蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力和溶解度，在一定濃度下提高成色的穩(wěn)定性。實驗操作1.蛋白質(zhì)標準曲線的繪制標準蛋白質(zhì)溶液的稀釋編號1234蛋白質(zhì)標準液/ml0.100.200.400.60生理鹽水/ml0.900.800.600.40稀釋后蛋白質(zhì)含量/(mg/ml)1.002.004.006.00血清白蛋白標準曲線的制作編號01234生理鹽水/ml0.20--------上述1～4管標準稀釋液/ml--0.200.200.200.20BCG應(yīng)用液/ml5.005.005.0

4、05.005.002.血清白蛋白的測定用生理鹽水按1：10的比例稀釋血清，取稀釋后的溶液0.02ml，加入BCG應(yīng)用液5.0ml，混勻后立即比色，讀取吸光度，并從標準曲線上查出相應(yīng)的白蛋白濃度。3.白蛋白與球蛋白的含量比用雙縮脲法測定血清標本中的總蛋白濃度，用總蛋白濃度減去白蛋白濃度即可得球蛋白的濃度，繼而得出白球蛋白比。計算公式血清總蛋白含量(g/L)=A總/A標×C標血清白蛋白含量(g/L)=A白/A標×C標白/球比值=白蛋白含量/(總蛋白含量-白蛋白含量)參考值總蛋白60~80g/L白蛋白35～50g/L白/球比值1.5~2.5臨床意義血清總蛋白生理

5、性波動。直立體位由于體液分布原因，血液相對濃縮，而長久臥床者血液較直立體位稀。因此長久臥床者血清總蛋白比直立活動時約低3～5g／L.新生兒血清總蛋白可比成人低5～8g／L.60歲以上的老年人約比成人低2g／L.長期營養(yǎng)不良、肝臟疾病，慢性腎炎等時，總蛋白含量降低；大量失水(如嘔吐、腹泄等)時則升高。肝臟疾病、慢性腎炎以及慢性傳染病有大量抗體生成時，白/球比值變小，甚至倒置。血清總蛋白增高：（1）血液濃縮，導(dǎo)致總蛋白濃度相對增高：嚴重腹瀉、嘔吐、高熱時急劇失水，血清總蛋白濃度可明顯升高。休克時，由于毛細血管通透性增加，血液中水分滲出血管。血液可發(fā)生濃縮，慢性

6、腎上腺皮質(zhì)功能減退的患者，由于丟失鈉的同時伴隨水的丟失，血漿也可出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象。（2）血漿蛋白質(zhì)合成增加：主要見于球蛋白合成增加，多發(fā)性骨髓瘤患者。血清總蛋白降低：（1）血液稀釋，導(dǎo)致總蛋白濃度相對降低：如靜脈注射過多低滲溶液或因各種原因引起的鈉、水潴留。（2）攝人不足和消耗增加：食物中長期缺乏蛋白質(zhì)或慢性胃腸道疾病所引起的消化吸收不良，因患消耗性疾病，如嚴重結(jié)核病，甲狀腺功能亢進，惡性腫瘤等，均可造成血清蛋白濃度降低。（3）蛋白質(zhì)丟失：嚴重?zé)齻麜r大量血漿滲出，大量失血，腎病綜合征時大量蛋白尿，潰瘍性結(jié)腸炎時腸道長期丟失一定量的蛋白質(zhì)，這些病理改變均可使血清

7、總蛋白濃度降低。白蛋白增高：主要由于血液濃縮而致相對性增高，如嚴重脫水和休克、嚴重?zé)齻?、急性出血、慢性腎上腺皮質(zhì)功能減低癥。白蛋白減低：見于肝硬變合并腹水及其他肝功能嚴重損害（如急性肝壞死、中毒性肝炎等）營養(yǎng)不良、慢性消耗性疾病、糖尿病、嚴重出血腎病綜合征等。當(dāng)降低至25g/L以下易產(chǎn)生腹水。血清球蛋白是機體免疫器官制造的，球蛋白正常值為20-40g/L。球蛋白大部分在肝細胞外生成，與人體的免疫力有關(guān)系。球蛋白要保持一定的量，球蛋白檢測值超過正常值說明體內(nèi)存在免疫系統(tǒng)的亢進，球蛋白檢測值低于正常值說明免疫力不足。當(dāng)體內(nèi)存在病毒等抗原時，機體的免疫器官就要增

8、兵，來消滅入侵者。因此，球蛋白產(chǎn)生增加。慢性肝炎和肝硬化患者的白蛋