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《最新臨床生物化檢驗實驗（一 實驗三 血清總蛋白、白蛋白及白 球比值的測定-藥學(xué)醫(yī)學(xué)精品資料.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、最新臨床生物化檢驗實驗（一）實驗三血清總蛋白、白蛋白及白球比值的測定-藥學(xué)醫(yī)學(xué)精品資料蛋白質(zhì)的定量分析是生物化學(xué)和其他生命學(xué)科最常涉及的分析內(nèi)容，是臨床上診斷疾病及檢查康復(fù)情況的重要指標(biāo)，也是許多生物制品、藥物、食品質(zhì)量檢測的重要指標(biāo)。在生化實驗中，對樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確可靠的定量分析，則是經(jīng)常進(jìn)行的一項非常重要的工作。血液的組成：血液的組成紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板血細(xì)胞血漿紅細(xì)胞（40%—50%）血漿50%~60%白細(xì)胞，血小板根據(jù)蛋白質(zhì)不同性質(zhì)建立的蛋白質(zhì)濃度測定方法：物理性質(zhì)：紫外分光光度法化學(xué)性質(zhì)：凱
2、氏定氮法、雙縮脲法（Biuret）、Lowry法(Follin-酚法)等染色性質(zhì)：考馬斯亮藍(lán)染色法（Bradford法）在選擇方法時應(yīng)考慮實驗對測定所要求的靈敏度和精確度蛋白質(zhì)的性質(zhì)溶液中存在的干擾物質(zhì)測定所要花費的時間PartⅠ總蛋白的測定 （雙縮脲法）a13％～4％a26％～10％b7％～11％g9％～18％總蛋白（60~80g/L)白蛋白：62~71%球蛋白：29~38%白/球比值1.5~2.5臨床意義1．血清總蛋白增高①血液濃縮，導(dǎo)致總蛋白濃度相對增高；②血漿蛋白質(zhì)合成增加。2．血清總蛋白降低①血
3、液稀釋，導(dǎo)致總蛋白濃度相對降低；②攝入不足和消耗增加；③合成障礙；④蛋白質(zhì)丟失。雙縮脲與雙縮脲反應(yīng)（Biuretreaction）實驗原理實驗原理蛋白質(zhì)與雙縮脲一樣，在堿性溶液中能與銅離子形成紫色配合物(即雙縮脲反應(yīng))其呈色深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。注意：此反應(yīng)并非蛋白質(zhì)所特有，凡分子內(nèi)含有兩個或兩個以上甲?；被?-CONH-)，不論是直接相連還是通過一個氮或碳原子間接連接，均可呈雙縮脲反應(yīng)。實驗材料與試劑1.721分光光度計，1.0cm比色皿2.試劑（1）生理鹽水（2）雙縮
4、脲試劑稱取硫酸銅3.0g溶于500ml蒸餾水中，加酒石酸鉀鈉9.0g，碘化鉀5.0g，待完全溶解后，加入24％NaOH100ml，并用蒸餾水稀釋到1L，置聚氯乙烯瓶內(nèi)蓋緊保存。（3）10mg/ml牛血清白蛋白（bovineserumalbumin,BSA，蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液）（4）稀釋血清：待測血清用生理鹽水按1:10稀釋操作步驟取3支試管，按下表操作測定管(T)標(biāo)準(zhǔn)管(S)空白管(B)血清(ml)1.00——蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(ml)—1.00—生理鹽水(ml)——1.00雙縮脲試劑(ml)5.005.005.00
5、混勻，37℃水浴放置10分鐘，以空白管（B管）調(diào)零，在540nm波長比色，分別讀取各管的吸光度。計算參考值60~80g/L1．雙縮脲試劑中酒石酸鉀鈉的作用是絡(luò)合銅離子，以維持銅離子在堿性溶液中的溶解性；碘化鉀為穩(wěn)定劑，能防止堿性酒石酸銅自動還原。2．由于各種血清蛋白質(zhì)的分子量不同，故其濃度不宜用mol/L表示，而用g/L表示。3．高脂、黃疽及溶血標(biāo)本應(yīng)作血清空白對照來校正誤差。注意事項（如何設(shè)置？）PartⅡ白蛋白的測定 （溴甲酚綠法）臨床意義1．血清白蛋白濃度增高常見于嚴(yán)重脫水所導(dǎo)致的血漿濃縮。2．血清
6、白蛋白濃度降低在臨床上比較重要和常見，通常與總蛋白降低的原因大致相同。急性降低主要見于大出血和嚴(yán)重?zé)齻?；慢性降低見于腎病蛋白尿、肝功能受損、腸道腫瘤及結(jié)核病伴慢性出血、營養(yǎng)不良和惡性腫瘤等。當(dāng)血清白蛋白低于20g/L時，臨床上出現(xiàn)水腫。3．A/G比值：正常值范圍為1.5~2.5。某些病人可同時出現(xiàn)白蛋白減少和球蛋白升高的現(xiàn)象，嚴(yán)重者A/G比值<1.0，稱為A/G比值倒置。實驗原理本法是在不分離血清中白蛋白的情況下直接測定白蛋白的一種方法。白蛋白具有與陰離子染料結(jié)合的性質(zhì)，在pH4.2的環(huán)境中，帶正電荷的白
7、蛋白(pI4.9)與陰離子染料溴甲酚綠(bromcresolgreen，BCG)結(jié)合，由黃色變?yōu)榫G色。藍(lán)綠色的深淺與白蛋白的濃度成正比。因此，應(yīng)用BCG法可以直接測定血清白蛋白的含量。試劑中加入非離子型表面活性劑，可提高蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力和溶解度，在一定濃度下能提高呈色的穩(wěn)定性。實驗材料與試劑1.721分光光度計，0.5cm比色皿2.試劑（1）工作試劑：琥珀酸緩沖液pH4.2表面活性劑：2.0g/L溴甲酚綠：0.1mmol/L（2）白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：4.0g/L（3）稀釋血清：待測血清用生理鹽水按1:10稀
8、釋操作步驟取3支試管，按下表操作測定管(T)標(biāo)準(zhǔn)管(S)空白管(B)工作試劑(ml)2.002.002.00血清(μl)100——白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(μl)—100—生理鹽水(μl)——100混勻，以空白管調(diào)零，在630nm波長立即比色，分別讀取各管的吸光度。計算參考值白蛋白：35~55g/LA/G：1.5~2.51．BCG除與白蛋白結(jié)合外，還可與α-球蛋白及β-球蛋白結(jié)合，但后者結(jié)合速度較慢，其顯色強度分別為白蛋白的20%及10%
